红花注射液对经TNF-a诱导的体外培养兔关节软骨细胞增殖及代谢的影响

论文摘要

目的:采用兔关节软骨细胞离体培养的方法,观察兔软骨细胞生物学特性;通过中药红花注射液对经TNF-a诱导损伤的体外培养兔关节软骨细胞的增殖及软骨细胞SOD、NOS活性和蛋白多糖含量的影响,探讨其防治OA的机制。方法:从新西兰兔关节分离软骨细胞进行体外培养,在倒置显微镜下观察原代及传代培养的细胞形态学变化,用甲苯胺蓝染色法和免疫组织化学法鉴定;MTT法检测不同浓度（10%,5%,2.5%,1.25%,0.625%,0.312%）红花注射液组对正常以及TNF-a诱导干预的软骨细胞增殖影响;SOD,NOS试剂盒分别检测体外培养细胞清液中SOD、NOS的活性;Alcian Blue法检测细胞外基质中蛋白多糖含量。结果:软骨细胞在原代培养中一般呈多角形、铺路石样外观,传代3次后出现去分化现象,出现部分长梭行细胞,第5代出现纤维细胞特点。形态学、免疫化学染色显示细胞培养3代以内可以保持表型的稳定。2.5%,1.25%,0.625%,0.312%的红花注射液对软骨细胞的增殖有明显的促进作用,与空白对照组相比有非常显著性的差异（P＜0.05）,其中1.25%红花组作用最强,5%,10%红花组对软骨细胞的增殖无促进作用,与对照组相比无显著性差异;经TNF-a诱导干预后,2.5%,1.25%,0.625%的红花注射液组与空白对照组、模型组比较有显著性差异（P＜0.05）,表明红花注射液能促进OA细胞增殖的作用。肿瘤坏死因子可显著升高软骨细胞中NOS活性,降低SOD活性,模型组和空白对照组比较有显著差异（P＜0.05）,红花注射液组能对抗上述结果,1.25%的浓度作用最强。1.25%的红花注射液组能促进细胞外基质中蛋白多糖的合成,具有显著性差异（P＜0.05）;2.5%,1.25%红花注射液组与模型组比较能促进经TNF-a干预的软骨细胞外基质中蛋白多糖的合成,其余各组无明显差别。结论:本实验建立的体外培养关节软骨细胞的方法简单易行;培养的细胞具有良好的生物学活性,细胞表型稳定可保持3代;软骨细胞经TNF-a诱导后,TNF-a可明显抑制细胞外基质中蛋白多糖的合成,显著升高NOS活性,降低SOD活性;中药红花注射液可有效的促进软骨细胞的增殖,并可有效的防止和拮抗TNF-a诱导的细胞损伤作用,调节软骨细胞代谢,减缓关节软骨的退变,从而起到防治OA的作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1.现代医学对OA的研究
• 1.1 OA的定义及其临床表现
• 1.2 OA的流行病学
• 1.3 OA发病机制的细胞分子学研究
• 1.4 自由基和OA的关系
• 2.中医药对OA的研究
• 2.1 OA的中医认识
• 2.2 中医药防治OA作用研究
• 3.现代医学关于OA治疗及存在问题
• 4.红花的药理学研究及立题依据
• 5.关于TNF-a造模的可行性
• 实验部分
• 第一章 家兔关节软骨细胞的分离和培养
• 1.1 材料和方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第二章 红花注射液对体外培养的正常和经TNF-a诱导软骨细胞增殖的影响
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第三章 红花注射液对体外培养的经TNF-a诱导的软骨细胞NOS、SOD活性的影
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第四章 红花注射液对体外培养的经TNF-a诱导软骨细胞蛋白多糖含量的影响
• 4.1 材料和方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 结语
• 展望
• 参考文献
• 附图
• 主要英文缩略语
• 在校期间发表的论文
• 致谢