论文摘要
目的：探讨不同分化阶段的脂肪细胞对肝细胞胰岛素抵抗的影响。方法：体外诱导分化3T3-L1前体脂肪细胞，随着细胞内脂滴增加，逐步成为不同分化程度的脂肪细胞。将不同分化阶段脂肪细胞（未分化Day0、中期分化Day4和完全分化Day8）与原代肝细胞共培养48 h。而后分别进行以下实验：1．通过western blot方法检测共培养后肝细胞内胰岛素信号通路的关键组分IRS-2和Akt的磷酸化水平以及肝细胞核内NF-κB p65的表达量。2．借助于同位素标记葡萄糖方法检测肝细胞糖原合成能力。3．采用ELISA方法分别检测诱导分化的脂肪细胞、肝细胞和共培养细胞分泌细胞因子IL-6和TNF-α的量。4．通过IL-6和TNF-α特异性抗体中和方法验证这两种细胞因子的媒介作用。5．western blot方法检测共培养后和加入IL-6或TNF-α特异性中和抗体后肝细胞核内NF-κB p65的表达量。结果：1．与单独培养的肝细胞相比，共培养后的肝细胞内胰岛素受体底物-2 （IRS-2）酪氨酸磷酸化（Tyr612）水平和Akt磷酸化（Ser473）水平均显著下调（P＜0.05）。2．与单独培养的肝细胞相比，共培养后肝细胞的糖原合成量也显著降低。3．各不同分化阶段3T3-L1细胞均能分泌IL-6，未检测到TNF-α。4．于共培养体系中加入IL-6或TNF-α特异性中和抗体使肝细胞胰岛素信号通路中IRS-2和Akt磷酸化水平部分恢复。5．中期分化（Day4）和完全分化（Day8）的3T3-L1脂肪细胞使肝细胞核内NF-κB p65的表达量增加；而于共培养体系中加入TNF-α特异性中和抗体使p65的表达量下调（P＜0.05）；加入IL-6特异性中和抗体，p65的表达量未受影响。结论：脂肪细胞可诱导肝细胞发生胰岛素抵抗，脂肪细胞分泌的细胞因子IL-6和TNF-α发挥了重要的媒介作用。
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