论文摘要
目的:胃癌是我国癌症中的头号杀手,是对人类健康危害极大的恶性肿瘤。目前的研究显示胃癌可能来源于干细胞。但胃癌干细胞的研究尚处于探索阶段。本实验包含两个方面的内容:⑴证明胃癌细胞系SGC-7901中存在肿瘤干细胞的等级结构。⑵建立一种培养胃癌干细胞的方法,并进行干细胞特性鉴定。方法:⑴本实验通过有限稀释法,分离单个细胞并观查其增殖情况,以证明在胃癌细胞系SGC-7901中存在肿瘤干细胞的等级结构。⑵应用添加有EGF、FGF和Insulin等生长因子的无血清培养基培养SGC-7901细胞,得到悬浮生长的细胞球。⑶利用有限稀释法、软琼脂克隆形成实验、NOD/SCID鼠体内异位移植成瘤实验、基因芯片技术、实时荧光定量PCR和流式细胞术等实验方法检测细胞球细胞的特性,并与贴壁生长的细胞相比较。结果:⑴运用有限稀释法,发现有血清培养基培养的单个SGC-7901细胞中,只有一小部分细胞能够存活、增殖,并最终形成能够稳定传代的细胞系;在无血清培养基中,也只有少量SGC-7901细胞能够悬浮生长并增殖成细胞球,细胞球细胞可多次传代,而且悬浮细胞的球形成能力大约是贴壁细胞的3倍。⑵软琼脂克隆形成能力实验中悬浮细胞组比贴壁细胞组形成更多更大的克隆集落。NOD/SCID小鼠成瘤实验显示,悬浮细胞在约86.67±11.55%的小鼠身上都能形成肿瘤,而贴壁细胞组成瘤率较低,只有13.33±11.55%左右。基因芯片结果显示,肿瘤球细胞高表达与干细胞相关的基因ABCG2、HES1和KRT153。用实时荧光定量PCR方法检测这三个基因以及CD44的表达情况,其结果与基因芯片结果基本一致。用流式细胞仪检测细胞表面ABCG2和CD44的表达情况,其结果同基因芯片和荧光定量PCR结果一致。结论:本实验不仅证明了胃癌细胞系SGC-7901中肿瘤干细胞的等级结构,而且还发现有一小部分SGC-7901细胞能够在无血清培养基悬浮生长并增殖成具有干细胞特征的细胞球。
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