景天属三种植物药的鉴定、总黄酮提取纯化及抗肿瘤活性研究

论文摘要

垂盆草(Sedum sarmentosum Migo.)、佛甲草(S. lineare Thunb.)及凹叶景天(S. emarginatum Migo.)是来源于景天科景天属的3种广泛使用的中药及民族药。其中,垂盆草的新鲜或干燥全草是该属中应用最多、使用面最广的中药,具清利湿热、解毒等功能,临床上用于治疗各种肝炎、湿热黄疸、小便不利、痈肿疮疡等,为垂盆草单方与复方制剂的原料药材,并已被多版中国药典收载;而同属近缘种植物药佛甲草、凹叶景天等在民间也常作为清热解毒、止血、促进伤口愈合药,广泛用于多种炎症、各种出血、烧烫伤、疮痈疔毒等的治疗。我国土家族地区还普遍将3种植物药用于多种癌症的治疗。由于3种植物药资源丰富,疗效应用广泛,值得深入研究,有一定开发推广应用的前景。三种药用植物(包括其他近缘种)外形相似,部分种之间常相互混淆。同时,产地尤其是采收期因素是否与各药材的质量存在相关性尚不清楚,它们的抗肿瘤活性也未得到有效验证,抗肿瘤有效部位不清。因此,笔者分别对景天属几种易混淆(药用)植物叶表皮特征、不同产地和采收期药材样品的总黄酮(根据文献分析为有效部位之一)含量、3种植物药总黄酮的提取与纯化方法以及它们各提取部位的抗肿瘤活性进行了比较研究,以期寻找新的区分几种易混淆种的方法,在前人研究的基础上进一步完善药材的质量控制指标,并实验验证3种植物药的抗肿瘤活性,明确有效部位。显微鉴定研究表明,景天属3种及其几种同属植物叶表皮细胞的形态特征在种内较稳定,种间差异大,可作为物种鉴别的重要依据。而气孔参数(气孔长宽比、气孔指数和气孔密度)受产地因素的影响较大,在本属几种植物分类鉴定上的价值不大。通过对景天属3种植物药不同产地、不同采收期的样品中总黄酮含量进行比较研究,发现各产地样品中总黄酮含量与其采收期存在显著相关性:垂盆草及佛甲草都在4月时总黄酮含量最高,6月时含量最低,入秋后又略有回升;而凹叶景天的总黄酮含量从4月至(9)10月持续下降。以总黄酮作为活性成分来考虑,笔者认为湖北地区所产3种植物药于盛花期采收质量较好,且鄂西所产的垂盆草、凹叶景天质量略优于鄂东所产。所建立的质量分析方法简便、快速,进一步完善了其品质鉴定方法。景天属3种植物药总黄酮的提取纯化方法研究表明,碱溶酸沉法较为简便,但所得提取物黄酮含量偏低;大孔树脂和聚酰胺联用技术可充分发挥两者优势,具有较好的富集效果,使垂盆草、佛甲草及凹叶景天总黄酮富集物中的黄酮含量分别达到了68.9%、54.0%和51.6%。利用四氮唑盐还原法(MTT法)检测景天属3种植物药垂盆草、佛甲草及凹叶景天的乙酸乙酯、正丁醇提取部位及总黄酮提取物对人肝癌细胞株HepG2、人食管癌细胞株EC109及人结肠癌细胞株SW480的体外增殖抑制作用,发现一定浓度的乙酸乙酯、正丁醇提取部位都有一定的抗肿瘤活性,但各药材总黄酮提取物的抗肿瘤活性最强。三种提取物的活性顺序为:总黄酮提取物>乙酸乙酯部位>正丁醇部位。因此推断黄酮类是这三种植物药的主要的抗肿瘤有效成分,这为进一步寻找新的高效安全的抗肿瘤成分奠定了基础。上述研究结果为景天属3种植物药的鉴定、品质评价与质量分析、深入研究及推广应用,以及寻找开发新的抗肿瘤药物资源提供了重要的参考和一定的实验依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第1章 景天属3 种植物药的研究概况
• 1.1 药材鉴定
• 1.2 含量测定
• 1.2.1 垂盆草
• 1.2.2 佛甲草
• 1.2.3 凹叶景天
• 1.3 化学成分
• 1.3.1 垂盆草
• 1.3.2 佛甲草
• 1.3.3 凹叶景天
• 1.4 药理作用
• 1.4.1 垂盆草
• 1.4.2 佛甲草
• 1.5 临床应用
• 1.5.1 垂盆草制剂治疗肝炎
• 1.5.2 垂盆草脉健方治疗肢体动脉粥样硬化闭塞症
• 1.5.3 垂盆草治疗压疮、暑疖和痈
• 1.5.4 垂盆草注射液治疗各类角膜溃疡
• 1.6 小结
• 第2章 景天属几种植物药叶表皮特征的比较研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 方法
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 景天属6 种药用植物叶表皮细胞形态特征
• 2.2.2 不同产地同种植物成熟叶表皮特征
• 2.2.3 景天属6 种植物药叶表皮气孔器特征
• 2.3 六种植物叶表皮细胞的共性与特征
• 2.3.1 叶表皮细胞的形态与一般特征
• 2.3.2 气孔大小
• 2.3.3 气孔长宽比
• 2.3.4 气孔指数
• 2.3.5 气孔密度
• 2.3.6 六种药用植物的叶表皮细胞鉴别检索
• 2.4 讨论
• 第3章 景天属3 种植物药总黄酮含量测定
• 3.1 仪器与材料
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 仪器与试剂试药
• 3.2 方法
• 3.2.1 供试品溶液的制备
• 3.2.2 对照品溶液的制备
• 3.2.3 显色与测定方法
• 3.2.4 测定波长的选择
• 3.2.5 提取溶剂的选择
• 3.2.6 方法学考察
• 3.2.7 样品含量测定
• 3.3 结果与讨论
• 3.3.1 总黄酮含量与样品采收期
• 3.3.2 总黄酮含量与产地
• 3.4 结论
• 第4章 景天属3 种植物药总黄酮提取纯化
• 4.1 仪器与材料
• 4.2 方法与结果
• 4.2.1 含量测定
• 4.2.2 垂盆草总黄酮纯化方法的比较
• 4.2.3 佛甲草总黄酮的纯化
• 4.2.4 凹叶景天总黄酮的纯化
• 4.3 讨论
• 第5章 景天属3 种植物药不同溶剂提取部位及总黄酮抗肿瘤作用研究
• 5.1 材料与方法
• 5.1.1 材料
• 5.1.2 方法
• 5.2 结果
• 5.2.1 三种植物药各提取部位的制得
• 5.2.2 三种植物药各提取部位对体外肿瘤细胞增殖的抑制作用
• 5.2.3 三种植物药各提取部位及总黄酮提取物体外抗肿瘤作用的比较
• 5.3 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录
• 附录B 有关植物照片