山梨醇转运子和SDH基因cDNA的克隆及其序列分析

论文摘要

山梨醇是蔷薇科植物主要的光合产物、运输和贮藏物质,起着其他植物中蔗糖的作用。山梨醇转运子是蔷薇科植物运输山梨醇的重要酶。本试验首先以“皇家嘎拉”苹果叶片为试材,根据报道的山梨醇转运子的保守区设计引物,经RT-PCR获得一条长度为581bp的片段,回收并进行测序。通过与GeneBank蛋白数据库比对分析发现其蛋白序列与三种苹果的序列MdSOT4、MdSOT6、MDSOT1同源性分别为95%、92%、92%;与酸樱桃（Prunus cerasus）、大豆（Glycine max）的同源性分别为78%、77%。应用SMART软件分析,该片断编码181个氨基酸,含有四个AgrB结构域,为一种跨膜蛋白结构。其次,以“皇家嘎拉”苹果叶片为试材,根据已知的多种植物的山梨醇脱氢酶序列,设计扩增苹果保守区上下游引物SDH1和SDH2,PCR扩增获得了SDH基因cDNA,经克隆测序获得4个cDNA序列,约600bp。同源性表明:该基因与苹果中已克隆的SDH基因家族具有很高的同源性,达9498%。同时与李、桃、番茄、马铃薯、拟南芥、水稻等也有很高的同源性,分别为87%、87%、82%、80%、80%、81%、80%。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 蔷薇科植物山梨醇的研究
• 1.1.1 山梨醇的含量及分布
• 1.1.2 山梨醇的功能
• 1.2 山梨醇的代谢及其相关酶的研究进展
• 1.2.1 山梨醇的代谢研究
• 1.2.2 山梨醇代谢相关酶的研究
• 1.3 糖运输蛋白基因克隆及其功能的研究进展
• 1.3.1 单糖运输蛋白基因克隆及其功能研究
• 1.3.2 蔗糖运输蛋白基因克隆及其功能研究
• 1.3.3 山梨醇运输蛋白基因（山梨醇转运子）克隆及其功能研究
• 1.4 本实验的目的和意义
• 第二章 山梨醇转运子基因CDNA 的克隆及序列分析
• 2.1 材料与试剂
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 仪器
• 2.1.4 PCR 引物
• 2.2 方法
• 2.2.1 总RNA 的制备
• 2.2.2 RT-PCR 体系的建立
• 2.2.3 PCR 产物的克隆
• 2.2.4 基因序列测定与分析
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 叶片总RNA 的提取
• 2.3.2 RT-PCR 体系的建立
• 2.3.3 序列测定与分析
• 第三章 苹果山梨醇脱氢酶基因（SDH）的克隆及其序列分析
• 3.1 材料与试剂
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 主要试剂和仪器（同2.1.2 和2.1.3）
• 3.1.3 PCR 引物
• 3.2 方法
• 3.2.1 总RNA 的制备（同2.2.1）
• 3.2.2 RT-PCR 体系的建立
• 3.2.3 PCR 产物的克隆（同2.2.3）
• 3.2.4 基因序列测定与分析
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 RT-PCR 体系的建立
• 3.3.2 序列测定与分析
• 3.3.3 Blastn 和Blastx 分析结果
• 第四章 讨论
• 4.1 关于RNA 的提取
• 4.2 关于RT-PCR 体系及各要素
• 4.2.1 PCR 反应体系五个要素
• 4.3 关于基因克隆
• 4.4 关于苹果中的山梨醇脱氢酶
• 第五章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介