原料乳中干酪非发酵剂乳酸菌的分离和鉴定

论文摘要

非发酵剂乳酸菌（NSLAB）是干酪微生物中一种独特的菌群,在干酪成熟过程中起着重要作用,会影响干酪风味形成和质构变化,还有利于干酪风味多样性的形成,因此,常需选用合适的NSLAB作为辅助发酵剂添加于干酪生产中。本研究对原料乳中的NSLAB进行分离和初步鉴定,采用传统的分离鉴定与分子学方法相比较和分析,得出快速准确鉴定菌株种属的方法,并对其生长特性进行分析研究,有利于更好的研究NSLAB。1.本实验从原料乳中分离出29株非发酵剂乳酸菌,经形态学特征、生理生化特征和API 50糖发酵试验初鉴定,其中Lactobacillus fermentum（10株）,Lactobacillus paracasei ssp paracasei（7株）,Lactococcus lactis ssp lactis（4株）,Lactobacillus crispatus（2株）,Pediococcus damnosus（2株）,Lactobacillus acidophilus（2株）,Streptococcus bovis（2株）。由此可知,分离得到的菌株主要是以乳杆菌为主。2.采用16S rRNA序列测定的方法对其中的7株实验菌株其进行随机鉴定,测序结果分析,发现各个测序菌株的同源性都与生理生化方法测得的结果有所差别。如Lact5与Lactobacillus fermentum K1同源性最高,而Lact1与Lactobacillus fermentum ZYD29c更相似;Lact6与Streptococcus infantarius subsp.infantarius同源性最高,而Lact3与Streptococcus lutetiensis 857更相似;Lact2与Lact4之间的同源性最高,与Lactococcus lactis subsp.cremoris最相似,Lact7与Lactococcus lactis subsp.lactis相似。3.通过对分离菌株进行的温度、pH值、NaCl耐受实验,得到菌株的总体生长状况,生长适宜温度在35-40℃,pH值是4.5左右,NaCl的耐受程度受菌种的差异而不同;根据生长曲线的绘制,得到菌株的生长期以及耐酸性的不同;另外,根据OPA法测得的菌株水解蛋白的能力不同,为根据不同的需要选取合适的NSLAB打下基础。本研究初步探索了原料乳中的非发酵剂乳酸菌的组成,同时为16S rRNA基因序列分析技术在菌株鉴定方面的应用奠定了基础。对菌株生长性质的研究,为进行非发酵剂乳酸菌辅助发酵剂的筛选提供了帮助。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 文献综述
• 1.1 引言
• 1.1.1 NSLAB 的定义
• 1.1.2 NSLAB 的分类
• 1.1.3 NSLAB 的来源
• 1.1.4 NSLAB 生长所需的碳源
• 1.2 NSLAB 对干酪质量的影响
• 1.2.1 NSLAB 对干酪风味的影响
• 1.2.2 NSLAB 对干酪质地的影响
• 1.2.3 NSLAB 对干酪成熟的影响
• 1.3 NSLAB 的筛选
• 1.3.1 传统的平皿培养法
• 1.3.2 现代的分子生物学方法
• 1.4 NSLAB 的鉴定
• 1.4.1 传统的细菌分类学鉴定
• 1.4.2 现代的分子生物学方法
• 1.5 实验目的和意义
• 2 非发酵剂乳酸菌的分离及初步鉴定
• 2.1 实验材料和设备
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验试剂
• 2.1.3 主要培养基配方
• 2.1.4 主要染色剂配方
• 2.1.5 仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 非发酵剂乳酸菌的分离
• 2.2.2 分离菌株的鉴定
• 2.3 实验结果与分析
• 2.3.1 样品中菌群的区系
• 2.3.2 分离菌株的鉴定结果与分析
• 2.4 讨论
• 2.5 小结
• 3 16S rRNA 对非发酵剂乳酸菌的序列分析
• 3.1 主要试剂和仪器
• 3.1.1 主要试剂
• 3.1.2 主要仪器
• 3.1.3 主要资源
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 引物设计与合成
• 3.2.2 模板制备
• 3.2.3 PCR 反应
• 3.2.4 测序
• 3.2.5 序列分析
• 3.3 实验结果与分析
• 3.3.1 琼脂糖凝胶电泳分析PCR 结果
• 3.3.2 16S rRNA 基因序列分析
• 3.4 讨论
• 3.5 小结
• 4 分离菌株的生长性质研究
• 4.1 主要试剂和仪器
• 4.1.1 主要试剂
• 4.1.2 仪器
• 4.2 实验方法
• 4.2.1 生长温度测定
• 4.2.2 pH 值范围测定
• 4.2.3 耐盐性测定
• 4.2.4 生长速率评价
• 4.2.5 蛋白水解能力检测
• 4.3 实验结果与分析
• 4.3.1 生长性测定结果
• 4.3.2 生长速率测得结果
• 4.3.3 蛋白活性测定结果
• 4.4 讨论
• 5 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 展望
• 参考文献
• 附录 A
• 附录 B
• 个人简介
• 第一导师简介
• 第二导师简介
• 致谢