论文摘要
鸡球虫病（Coccidiosis）是由艾美耳球虫（Eimeria）引起的一种严重危害养禽业发展的寄生原虫病,传统的防制办法还存在一些问题。核酸疫苗是一种新的生物技术疫苗,具有可靠的安全性、高稳定性、能诱导机体产生全面的免疫应答等优点。近年来,鸡球虫核酸疫苗的研究取得了重要进展。本实验室已从E.acervulina和E.necatrix孢子化卵囊分别克隆得到免疫保护性抗原基因3-1E和NA4,并利用DNA重组技术成功构建了免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-NA4-IL-2和pVAX1.0-3-1E-IL-2,实验表明这两种DNA疫苗对本种球虫感染均具有较好的免疫保护作用。用DNAStar中的MegAlign软件对3-1E和NA4抗原的基因进行分析,结果发现3-1E抗原在E.tenella和E.acervulina之间基因序列的同源性达99.8%,氨基酸序列的同源性为99.4%;NA4抗原与E.tenella的TA4抗原之间基因序列的同源性达91.4%,氨基酸序列的同源性为86%。用Protean软件对3-1E和NA4抗原的二级结构和抗原性进行预测分析,结果表明这两个抗原均具有很好的抗原性。将免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-3-1E-IL-2经腿部肌肉分别于14、21日龄两次免疫雏鸡,28日龄经口接种新鲜的E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和E.maxima孢子化卵囊,34日龄宰杀全部实验动物,分别作肠道病变计分、肠道卵囊计数、增重和存活率几个指标测定,以抗球虫指数（ACI）综合判定其保护性。结果表明,免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-3-1E-IL-2抗E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和E.maxhna的ACI值分别为180.11、174.24、180.64和164.74。用同样的方法对免疫调节型DNA疫苗pVAX1.0-NA4-IL-2进行交叉免疫保护性实验,结果发现,pVAX1.0-NA4-IL-2抗E.tenella、E.necatrix、E.acervulina和E.maxima的ACI分别为180.35、181.20、171.63和161.89。本研究通过序列分析和动物交叉免疫保护性实验分别证明了鸡球虫3-1E抗原和NA4抗原对四种艾美耳球虫均具有部分交叉免疫保护作用,这两种抗原有可能作为艾美耳球虫交叉免疫保护性DNA疫苗的候选抗原。