槲皮素对结肠癌细胞生长的影响及分子作用机制探讨

论文摘要

研究目的:表观遗传修饰中甲基化状态的改变是致癌作用的一个关键因素,启动子区CpG岛发生高甲基化是导致抑癌基因失活的一种主要机制。环境变化改变基因表观遗传修饰是目前研究的热点,本论文选择环境物质植物雌激素槲皮素,研究其对结肠癌细胞系RKO生长、细胞周期和细胞凋亡的影响,通过检测抑癌基因p16启动子高甲基化状态的变化,初步探讨其抑瘤的分子作用机制。研究方法:选择p16启动子区CpG岛高度甲基化的人结肠癌细胞系RKO为研究对象,应用四唑盐（MTT）比色法检测RKO细胞系增殖的变化,应用流式细胞仪检测RKO细胞周期和细胞凋亡的变化,应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测p21、p27和p16基因mRNA表达的变化,应用蛋白印迹（Western blot）方法检测p21、p27、p53和p16蛋白表达的变化,应用甲基化特异性PCR（Methylation-specific PCR,MSP）检测抑癌基因p16启动子区CpG岛甲基化水平的变化。结果:MTT结果显示槲皮素能明显抑制肿瘤细胞的增殖;流式细胞仪分析显示经5μmol/L槲皮素作用2天后,细胞周期明显阻滞在G0/G1期,加药组凋亡细胞率明显高于对照组。加药后p21、p27和p16基因mRNA的表达均有增强,p21、p27、p53和p16蛋白表达均有增强。p16抑癌基因启动子区高甲基化的状态发生逆转并呈剂量依赖趋势。结论:本论文显示槲皮素对人结肠癌细胞系RKO具有良好的抑制作用,对RKO细胞周期和细胞凋亡都有影响,抑癌基因p16启动子甲基化状态的变化提示槲皮素可能是通过表观遗传修饰机制恢复抑癌基因表达,从而发挥了抗瘤作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 实验材料与方法
• 一.实验材料
• 二.实验方法
• 实验结果
• （一） 槲皮素对RKO细胞系生长的抑制作用
• （二） 槲皮素对RKO细胞系细胞周期的影响
• （三） 槲皮素对RKO细胞凋亡的影响
• （四） 槲皮素对RKO细胞P21、p27和P16基因MRNA表达的影响
• （五） 槲皮素对RKO细胞P21、p27、p53和P16蛋白表达的影响
• （六） 槲皮素对RKO细胞P16启动子区CpG岛甲基化水平的影响
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述
• 附录:缩略词表
• 致谢
• 个人简历