论文摘要
目的：胰腺癌是一种凶险的恶性肿瘤，发病率有逐年上升趋势，近30年来发病率已增长3～7倍。其血供丰富，静脉和淋巴引流途径较多，肿瘤生长迅速，易侵犯周边器官及远处转移，单一化疗或放疗效果不理想，所以针对易侵袭因素的靶向治疗将可能提高胰腺癌的治愈率及改善预后。肿瘤血管生成不仅与肿瘤的生长和转移密切相关，而且在肿瘤病理分级、治疗和预后判断上具有重要的评估价值。研究表明，细胞粘附分子介导的细胞粘附行为异常在肿瘤的浸润和转移中有重要作用。近年，随着免疫和分子生物学的发展，肿瘤血管生成及抗血管生成逐渐成为肿瘤研究的重点和热点之一，细胞粘附分子与血管生成的关系也日益受到关注。研究发现，整合素αVβ3不仅在多种实体肿瘤细胞表面不同水平的表达，而且在血管内皮细胞不同程度的表达αVβ3、αVβ5、β1、α3、α2、α6、β4等。因此，选择整合素αVβ3的反义基因、单克隆抗体或者拮抗肽，来治疗肿瘤的实验是近年肿瘤研究的一个热点。本实验旨在研究整合素αVβ3反义基因治疗大鼠胰腺癌的疗效，以及对胰腺癌血管生成及细胞凋亡的影响，进一步探讨整合素αVβ3在肿瘤发生、发展中的作用，为胰腺癌的治疗提供新的思路。方法：把αVβ3反义基因表达载体AlphaV／pcDNA3、Beta3／pcDNA3转入感受态细菌，细菌扩大培养，质粒大提后酶切鉴定。4周龄雄性大鼠120只，随机分为4组，每组30只。大鼠胰腺被膜下包埋二甲基苯蒽线结，建立胰腺癌模型。6周后病例证实成瘤，并采用瘤内注射质粒电转染方法，每组分别用αV、β3及αVβ3的反义基因进行基因治疗（对照组注射空壳质粒），观察肿瘤生长情况，记录肿瘤大小。6周后切取肿瘤秤重，计算抑瘤率。采用免疫组织化学S-P法分别检测αV、β3蛋白以及的表达，计数微血管密度（microvessel density, MVD）。采用TUNEL法（TdT-mediated biotinylated-dUTP nick end labling method）检测各组的细胞凋亡情况，并计算凋亡指数（apoptosis index，AI）。并对各组间αV、β3蛋白以及MVD、AI进行比较。结果：（1）各组肿瘤体重有明显差异，对照组，αV，β3及αVβ3组瘤重分别为1.167±0.79g，0.953±0.26g，1.013±0.42g，0.788±0.56g。αV、β3及αVβ3组与对照组比较有明显差异（P＜0.01）；αVβ3组与αV组和β3组比较有差异（P＜0.05）。αV、β3及αVβ3组的抑瘤率分别为17.909％，13.196％，32.476％。（2）αV、β3蛋白在实验组及对照组中均有表达，对照组13例中有12例表达阳性，阳性率为92.31％，αV组、β3组的表达率为76.92％、80.00％，与对照组比较阳性分布有差异（P＜0.01）。（3）对照组、αV组、β3组、αVβ3组微血管密度计数分别为18.333±1.398、13.800±1.063、15.967±1.245、12.166±1.234，实验组与对照组比较有显著差异（P＜0.01）；αVβ3组与αV组和β3组比较有差异（P＜0.05）。（4）细胞的凋亡指数（AI）对照组、αV组、β3组、αVβ3组分别为12.300±1.393％，22.167±1.234％，20.367±1.066％，24.100±0.995％，αV组、β3组、αVβ3组与对照组比较有极显著差异（P＜0.01）；αVβ3组与αV组和β3组组间比较比较有差异（P＜0.05）。结论：（1）αV、β3反义基因能够减缓肿瘤的生长，对肿瘤生长有明显抑制作用。（2）αV、β3反义基因可能通过抑制肿瘤的血管生成对肿瘤生长起抑制作用。（3）αV、β3反义基因可以促进肿瘤细胞凋亡。（4）αV、β3反义基因联合应用会取得更好治疗效果。
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标签：大鼠论文; 整合素论文; 胰腺癌论文; 反义基因论文; 基因治疗论文; 血管生成论文; 凋亡论文; 微血管密度论文; 免疫组化论文;