超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的实验研究

论文摘要

儿童骨关节结核的治疗一直是儿童骨科医师面临的一大难题。目前骨关节结核的治疗是包括抗结核药物化疗、病灶清除术及营养支持等的综合疗法,而应用抗结核药物是治疗骨关节结核的中心环节。硫酸链霉素作为目前临床上的一线抗骨关节结核药物,其主要副作用是显著的第八对颅神经损害及肝肾毒性【1】,这极大地限制了其临床应用。近年来飞速发展的磁性微球靶向给药技术在提高药物对病灶的靶向性及降低药物的毒副作用方面显示出巨大的发展前景【2】。普通磁性微球制剂进入体内后易被单核巨噬细胞系统作为异物认别而吞噬,显著降低了其对病灶的靶向性。目前重要的研究策略之一是对微球进行表面修饰,制备能逃避单核巨噬细胞系统识别和吞噬的隐形磁性微球系统【3】。本实验以能阻止单核巨噬系统细胞识别、吞噬的长链聚乙二醇修饰的聚乳酸共聚物（PLA-PEG）作为磁性微球载体,制备超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球。检测该微球的各项特征,研究该微球在振荡磁场作用下的释放规律,在不同温度下保存的稳定性,并同时考察了该微球的体外抗结核分支杆菌的效能。本文首先采用目前较为成熟的化学共沉淀法制备超顺磁性壳聚糖Fe3O4纳米粒,通过透射电镜检测其粒径,振动样品磁强计测定纳米粒的磁感应性能。首次采用原子力显微镜（AFM）初步分析其微观构成方式。结果表明所制备的壳聚糖Fe3O4纳米粒粒径分布于2030 nm,具有良好的超顺磁性,由AFM的检测结果推测Fe3O4中的Fe原子与壳聚糖中的游离氨基中的氮原子可能通过-NH-Fe-共价键结合。再采用复乳化-溶剂挥发法（W/O/W）制备超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球,所制得的微球平均粒径为2.467μm。本文同时建立了高效液相色谱法（HPLC）检测硫酸链霉素浓度以考察微球的包封率和载药量,外加静磁场考察微球磁感应。以微球的平均粒径、磁感应性及包封率等指标考察内外水相中PVA浓度、内水相与油相体积比、复乳与外水相体积比、超声乳化时间、均质机作用时间及均质机速度等因素对微球制备影响。确定了较佳的制备工艺为内外水相中PVA浓度分别为1.5%、0.5%,内水相与油相体积比为1∶4,复乳与外水相体积比为1∶20,超声乳化时间90 s,均质机作用时间90 s,均质机速度为24 kr/min。本文研究了在自制大功率振荡磁场发生器产生的振动磁场干预下超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球药物释放规律。每隔24 h取样,取样前振荡磁场干预30 min,HPLC检测模拟体液中硫酸链霉素浓度,计算硫酸链霉素的释放率,并绘制各组微球的溶出曲线。结果表明,与未加磁场的超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球相比,各时间点的释放率都有提高。此外,未加磁场干预的超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球组与硫酸链霉素PLA-PEG微球组相比也有较高的释放率。本实验同时考察了超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球在不同温度下保存的稳定性,结果表明该微球在-30℃条件下保存3月后微球的外观、载药量及磁感应性保持良好。通过在改良罗氏培养基上采用绝对浓度法进行人型结核分支杆菌的硫酸链霉素药敏试验,以检验超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的制备工艺及配方对微球中硫酸链霉素药效有无影响。用超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的溶出液制备结核分支杆菌的药敏培养基,与硫酸链霉素培养基对照。药敏试验结果显示实验组、对照组中15株结核分支杆菌在高低浓度硫酸链霉素培养基上的生长均有抑制;分别比较实验组与对照组高、低浓度硫酸链霉素培养基对结核分支杆菌生长的抑制作用,采用M-H检验,P值均> 0.05,即实验组与对照组高、低浓度硫酸链霉素培养基对结核分支杆菌的抑菌效能差异无统计学意义,表明超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球的制备过程及配方对硫酸链霉素的药效无明显影响。实验组和对照组15株结核分支杆菌的耐药率分别为73.33%、80.00%,采用Fisher精确概率法比较,P>0.05,即实验组和对照组间耐药率比较差异无统计学意义。本实验所制备的超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球外观完整、均匀,平均粒为2.467μm,在体外具有良好的磁响应性。在体外的溶出实验中振荡磁场可明显提高硫酸链霉素的释放。体外人型结核分支杆菌的药敏试验也表明该超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG微球具有良好的抗结核分支杆菌效能。

论文目录

• 英汉缩略语名词对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG 微球的制备及特征考察
• 3O₄纳米粒的制备及检测'>第一节 超顺磁性壳聚糖Fe₃O₄纳米粒的制备及检测
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 第二节 超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG 微球的制备及检测
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 第三节 振荡磁场下超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG 微球的释放特征
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 第四节 超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG 微球的稳定性考察
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 讨论
• 第二部分 超顺磁性硫酸链霉素PLA-PEG 微球的体外药敏试验
• 1 实验材料
• 2 实验方法
• 3 实验结果
• 讨论
• 全文总结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表文章情况