PDGF-h-α-Synuclein转基因帕金森病小鼠模型的建立

论文摘要

帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种年龄相关的慢性进行性神经系统疾病,静止性震颤、强直、运动徐缓、步态不稳等是其主要的临床特征,现在已成为威胁老年人健康的主要疾病之一。帕金森病主要病理特征表现为黑质纹状体多巴胺能神经元变性和缺失,细胞内包含体—路易小体（Lewy body,LB）的形成。α-Synuclein是帕金森病特征性病变路易小体的主要成分,在帕金森的发病机制中发挥重要作用。生理条件下,它可调节突触血管的再生和重塑,同时在脂质代谢,信号转导及囊泡转运等方面也有重要作用。研究发现早发型家族遗传性帕金森病患者出现α-synuclein基因的错义突变A53T和A30P,及野生型二倍体表达增多。突变的α-synuclein可促进自身寡聚物的形成,增加其神经毒性。但是,突变及过量表达的α-synuclein究竟是通过何种分子机制促进了PD的发生至今仍不清楚。因此建立α-synuclein转基因动物模型可为今后帕金森病的研究提供有力的模型基础。为了更好的研究α-synuclein在PD发病过程中的作用,本实验采用神经特异性启动子PDGF,建立了在神经系统特异性表达人α-synuclein野生型及两个突变型A53T和A30P的转基因小鼠。构建人α-synuclein表达载体,利用显微注射法制备人α-synuclein基因的转基因小鼠。通过PCR方法鉴定转基因首建鼠及其子代基因型。通过RT-PCR和Western blotting方法鉴定转基因小鼠脑组织中人α-synuclein mRNA和蛋白表达情况。得到表达水平不同的野生型人α-synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A53T突变型α-synuclein转基因小鼠2个品系。得到表达水平不同的A30P突变型α-synuclein转基因小鼠3个品系。采用免疫组化鉴定人α-synuclein在小鼠脑组织中的表达情况。实验结果显示,转基因小鼠大脑海马、新皮层、纹状体区出现人α-synuclein阳性标记的细胞。通过Rota rod实验评价转基因小鼠的行为改变情况,发现三种转基因小鼠运动能力均有明显下降,A53T,A30P和SYN-WT三种转基因小鼠与阴性对照鼠相比分别下降45.4%,46.2%和45.5%。以上结果显示,我们已成功建立人α-synuclein转基因小鼠帕金森病模型,可为今后帕金森病发病机制的研究及帕金森病药物的开发提供模型基础。但α-synuclein对帕金森病作用机制尚有许多不明之处,还需做进一步的研究。

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