论文摘要
条件致病菌感染病原菌多为耐药菌,其主要来源于呼吸道、肠道、生殖道等粘膜表面,其感染常见于严重创伤、烧伤、移植术后、成人免疫缺陷综合征等重症患者。目前尚无良好的预防手段。粘膜上皮细胞有一个共同特点,即在细胞膜上具备多聚IgA受体（pIgR）。连有J链的IgA分子通过J链与pIgR结合后,将IgA分子转运入粘膜细胞内。本研究拟将防御素改建为一种杀菌分子,分子的一端为J链,另一端为防御素,称之为多聚IgA受体（pIgR）配体样杀菌肽。这种杀菌分子因连有J链,具有与pIgR结合的能力。从而利用pIgR作为桥梁,将防御素转运至细胞内的微生物感染处发挥杀菌作用。本研究将HNP-1（属α-防御素）与J链cDNA连接,然后在哺乳动物细胞系统中表达,并初步检测其产物体外抗菌活性,为进一步研究其细胞内杀菌功能提供依据。 方法: 应用PCR技术从不同的质粒中获得J链基因和HNP-1基因,然后应用重组PCR技术将这两个不同的基因连接在一起而成为J-HNP-1基因。将此基因克隆入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1（-）/Myc-HisC中。用脂质体转染法将此重组子导入COS-7细胞,分别从mRNA和蛋白质水平采用RT-PCR和Western blot分析J-HNP-1的表达情况,并体外检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。 结果: 1.利用重组PCR技术使J链与HNP-1这两个不同的基因相连接而成为J-HNP-1重组体。 2.将J-HNP-1重组体克隆入哺乳动物表达载体pcDNA3.1（-）/Myc-HisC质粒中,双重标签基因Myc和6×His位于下游,6×His起着检测标志的作用,使J-HNP-1的表达产物易于检测。 3.将重组质粒rpcDNA3.1（-）/Myc-HisC/J-HNP-1应用正、反方向引物测序,检测J-HNP-1的DNA序列及鉴定插入的正反方向,获得正向插入重组子。 4.RT-PCR结果显示转染rpcDNA3.1（-）/Myc-HisC/J-HNP-1的COS-7细胞mRNA
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相关论文文献
- [1].人J链基因的克隆及原核表达研究[J]. 中国现代医学杂志 2009(18)