论文摘要
第一部分:EGFR信号通路对人胶质瘤细胞系GL15增殖的调控作用目的探讨EGFR信号通路对于人胶质瘤细胞系GL-15细胞增殖及PCNA表达的影响。方法应用细胞培养技术培养GL15细胞,免疫组化法检测胶质纤维酸性蛋白（Glial fibrillary acidic protein, GFAP）、EGFR表达情况,细胞计数法检测不同浓度的EGF对于胶质瘤细胞增殖的影响,分别运用免疫组化法和流式细胞仪检测不同浓度EGF作用后PCNA表达情况。结果GFAP在GL15细胞呈散在表达,EGFR明显的高表达;剂量小于等于1ng/ml的EGF对于胶质瘤细胞有促增殖作用,与对照组相比,细胞数目明显增加,EGF作用后细胞核PCNA的表达明显增加;而10ng/ml、100ng/ml的EGF对于胶质瘤细胞生长有明显的抑制作用,PCNA的表达明显减少。结论GL15细胞为典型的胶质母细胞瘤,EGFR信号通路对于胶质瘤细胞的生长影响具有双相调控作用,小剂量EGF可促进细胞增生,大剂量EGF可抑制细胞生长。第二部分:EGFR信号通路对胶质瘤细胞系GL15增殖双相调控的分子机制目的探讨EGFR信号通路对于人胶质瘤细胞系GL-15细胞细胞周期及及细胞内钙信号的影响。方法以不同浓度的EGF处理GL15细胞,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率的改变,激光扫描共聚焦显微镜（laser scan confocal microscope, LSCM）检测EGF对于细胞内游离钙离子浓度的影响。结果0.1ng/ml、1ng/mlEGF作用后,与对照组相比,G0/G1期细胞比例明显下降,S期比例增加,10ng/ml、100ng/mlEGF作用以后均出现明显的亚G1峰,细胞凋亡率明显升高,EGF可明显诱导细胞内游离钙离子浓度的增加,但大剂量EGF组诱导的细胞内钙升高的辐度明显高于小剂量组。结论小剂量的EGF有促进肿瘤细胞由静止期转入DNA合成期的作用,大剂量EGF能诱导细胞凋亡并导致细胞的增殖受抑制,EGFR信号通路的差异性调控可能与细胞内钙信号的差异有关。第三部分:转染LRIG1基因对于胶质瘤细胞增殖及细胞内钙信号的影响目的探讨LRIG1基因对于胶质瘤细胞系GL15增殖及EGFR信号通路的影响,为胶质瘤发生机制的研究和基因治疗提供理论依据。方法采用基因转染技术,将LRIG1-EGFP真核表达载体转染到GL15细胞系中,了解其对细胞增殖能力及细胞周期的影响,应用共聚焦显微镜检测转染后对EGF引起的细胞内钙信号的变化情况。结果转染LRIG1基因能抑制EGF引起的细胞生长,对细胞周期分析表明,处在G0/G1期的细胞由47.13%±1.79增加到62.42%±2.18,细胞内钙离子浓度检测表明转染后EGF引起细胞内钙离子浓度升高的辐度明显下降。结论LRIG1蛋白能抑制0.1ng/mlEGF刺激生长作用,其作用机制可能与抑制蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）途径从而降低了细胞钙离子浓度升高有关,导入LRIG1基因是一种潜在治疗胶质瘤的新途径。
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