论文摘要
SNX-2112是近几年筛选出的一种新型Hsp90抑制剂,它可以特异性与Hsp90家族ATPpocket结合,抑制Hsp90活性,诱导Hsp90受体蛋白降解,最终导致肿瘤细胞的凋亡,是一种具有开发前景的抗肿瘤药物,但SNX-2112作用的具体分子机制不详。本研究以人慢性髓细胞白血病细胞系K562为细胞模型,采用MTT法、Annexin-v/PI荧光染色法、流式细胞技术和Western Blot等方法,检测SNX-2112对K562细胞增殖、凋亡及caspase家族蛋白质表达的影响,结果表明SNX-2112（0.05-10μM）可以抑制K562细胞的增殖(IC50=0.92μM)并诱导其凋亡（凋亡率为10.6±2.1-75.8±7.4%）。在0.1-10μM范围内SNX-2112可以引起caspase-3,9和PARP前体活化,具有剂量依赖性。利用全基因组表达谱芯片对1μM SNX-2112作用48 h后K562细胞的全基因组cDNA表达进行了检测,G0分析发现229个基因（占检出基因的10.75%）与线粒体功能有关,尤以线粒体代谢相关基因显著（占62.51%）,这一结果也为SNX-2112引起线粒体功能损伤提供了依据。通过双向凝胶电泳,获得药物作用细胞的双向电泳图谱,MALDI TOF/TOF质谱仪对差异表达的蛋白质点进行鉴定证实了55个差异点,生物信息学方法将这些蛋白质按功能进行分类发现有7个差异点与线粒体功能相关。最后进一步研究了SNX-2112诱导K562细胞凋亡的机制。结合检出的Caspase家族活化通路和转录组与蛋白质组学的研究结果我们推断SNX-2112通过线粒体损伤的内源性通路介导了K562细胞凋亡。JC-1染色实验和cyto-c释放的Western Blot检测证实了这一结论。蛋白质组学的研究中鉴定出的差异蛋白质CRKL和Grb2为我们揭示出线粒体功能损伤的上游信号部分来自于Akt信号转导通路,Western Blot和co-IP实验证明了这一点。体内实验选用尾静脉接种K562细胞的NOD/SCID小鼠作为慢性髓细胞白血病模型。接种小鼠给予SNX-2112（6mg/kg,iv）处理,同时分别设立17-AAG和阴性对照组。观察各组小鼠存活时间、测定人慢性白血病表面抗原CD13,CD33。结果表明SNX-2112可以抑制小鼠体内白血病细胞增殖,延长其生存期。本研究证明SNX-2112具有潜在的体外、体内慢性白血病治疗活性,并探索了该化合物抗肿瘤的部分作用机制,为进一步开发具有自主知识产Hsp90抑制剂药物建立了理论基础。
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