论文摘要
目的：通过检测肺癌患者转化生长因子P1（TGFβ1）基因单核苷酸多态性及其放疗前后血浆中TGFβ1细胞因子水平的动态变化,研究其与放射性肺炎发生的关系,评价TGFβ1基因多态性以及TGFβ1细胞因子水平的动态变化对放射性肺炎的预测价值,探讨其作为放射性肺炎易感性指标的可能性,从而指导放疗方案的制定,达到提高肺癌局部控制率,延长患者生存的目的。方法：收集2010年7月至2010年12月期间在滨州医学院附属医院肿瘤科及呼吸内科住院的136例肺癌患者（曾行或者正在进行三维适型放疗）的外周静脉血,用淋巴细胞分离液分离血清及淋巴细胞,分别留取冻存。提取淋巴细胞的DNA。用光度测试仪检测DNA的纯度和浓度。引物序列为rs1800468与rs1800469上游引物：5’-TGG AGT GCT GAG GGA CTC TG-3’,下游引物：5’-AGG CGG AGA AGG CTT AAT CC-3’, rs1800470与rs1800471上游引物：5’-CCT CCG GGC TGC GGC TGC TG-3’,下游引物：5’-CCG CAG CTT GGA CAG GAT CTG-3’。经多重PCR反应扩增目的基因SNP序列（rs1800468:A-800G, rs1800469:C-509T, rs1800470: T869C, rs1800471:G915C）、纯化、延伸PCR扩增产物,将延伸产物上ABI测序仪。用SNaPshot的方法确定TGFβ1基因4组核苷酸多态性。同时留取研究期间在我院接受全程放疗的37例肺癌患者的血清,分别在放疗前、放疗中、放疗结束、放疗后2周、放疗后4周应用EDTA防凝管采集血液标本2m1,采用酶联免疫吸附实验法（ELISA）检测血浆中TGFβ1的水平。分析临床因素、TGFβ1基因SNP、放射治疗前后血清中TGFβ1的动态变化、剂量体积直方图（DVH）与放射性肺炎发生的关系。结果：134例患者的样本中,位点rs1800469:C-509T CC基因型占32.1%、TT基因型占29.1%、 CT基因型占38.8%,位点rs1800470:T869C TT基因型占29.9%、CC基因型占28.4%、TC基因型占41.8%,而位点rs1800468: A-800G和rs1800471:G915C均只表现为GG基因型。这些TGFβ1基因型的分布频率与性别、年龄、病理类型、吸烟、化疗、肿瘤放射剂量无关。位点rs1800469:C-509T CC基因型和位点rs1800470:T869C TT基因型患者出现RP的概率分别为30.2%、42.5%。而位点rs1800469:C-509T CT/CC基因型和位点rs1800470:T869C TC/CC的患者出现概率分别为27.5%、22.3%。单因素分析发现位点rs1800470:T869C TC/CC基因型患者发生RP的风险较低（HR=0.389;95%CI:0.176-0.860; P=0.018）,通过对37例肺癌患者TGFβ1的动态监测,发现放疗开始,放疗中,放疗结束3个时间点RP组TGFβ1水平有逐渐下降的趋势。而放疗后患者TGFβ1升高,4周后升高明显,有统计学意义（P=0.005）。对于2级以上的RP,这种趋势同样符合。通过重复测量方差分析,TGFβ1的动态变化与RP的发生有关。我们同时分析了rs1800470:T869C不同的基因型与放疗前后不同时间点的TGFβ1水平的关系。在RT前、RT中、RT后2周、RT后4周4个时间点,患者T869C位点TC基因型血浆TGFβ1水平明显低于TT/CC基因型,并有统计学意义。在RT后2周、RT后4周这2个检测点,TT基因型血浆TGFβ1水平高于CC+TC基因型,同样有统计学意义。通过对放疗开始,放疗中,放疗结束3个时间点TGFβ1水平的测定,发现TT组TGFβ1水平有逐渐下降的趋势,放疗后患者TGFβ1升高,4周后升高明显,但通过重复测量方差分析,TT基因型TGFβ1的动态变化与RP的发生无统计学意义。结论：研究发现TGFβ1基因rs1800470:T869C基因型TT可以提高肺癌患者放疗后发生放射性肺炎的风险,可以作为RP的预测指标,从而制定合理的放疗方案。TC/CC基因型RP患病风险较低主要是由于TGFβ1水平的降低,尤其是TC基因型低表达TGFβ1.而TGFβ1的动态变化与RP的发生及其发生的严重程度相关,动态监测其变化也有助于早期预测RP发生。