RAS超家族基因RRP22在星形胶质瘤中的表达及对其生物学行为影响

论文摘要

背景：星形胶质细胞瘤是中枢神经系统中最常见的恶性肿瘤,尽管目前在外科切除,放化疗及其他生物学治疗上取得了一些进展,但其预后仍然很差。所以,深入研究其发生发展的细胞及分子机制具有重大现实意义。Ras基因是第一个被鉴定出的人类癌基因,其家族的三个主要成员分别为H-ras、K-ras和N-ras。据报道,15%的恶性肿瘤中可检测出Ras基因表达异常。近年来,学者们引出了Ras超家族这个概念。Ras超家族是一类重要的功能蛋白,其介导了生长因子、细胞因子及多种细胞外信号信息通路,对细胞的生长、分化、存活、增殖等多种生物学功能的调节发挥重要作用。近年来,研究发现Ras超家族中包括一些独特的成员,它们为细胞生长的负向调节者,具有肿瘤抑制作用。RRP22作为一个新定义的Ras超家族基因,定位于22号染色体12q,并且特异的表达于中枢神经系统中。目前关于RRP22的研究报道很少,而且主要集中于基因序列及其在各肿瘤细胞系表达方面。它在人脑胶质瘤组织中的表达情况及对肿瘤的生物学影响目前国内外均无相关报道。我们推测其对神经细胞的生长、增殖、迁移、凋亡等多种生物学特性起关键调控作用,但’是这一推测尚待在实验过程中研究证实。目的：探讨RRP22基因在人脑胶质瘤组织中的表达情况及与病理分级关系。通过质粒转染技术在人胶质母细胞瘤细胞株U251中过量表达RRP22,探讨RRP22对胶质瘤细胞生长、增殖、迁移、凋亡等多种生物学特性的影响。方法：收集61例新鲜胶质瘤和5例新鲜脑组织标本,用定量RT-PCR检测其RRP22 mRNA表达差异及与胶质瘤病理分级的关系。将RRP22克隆入pZsGreen1-C1真核表达载体并进行酶切及DNA测序鉴定。用Lipofectamin脂质体法将重组RRP22-pZsGreenl-Cl稳定转染人胶质母细胞瘤细胞株U251细胞系,并使用定量RT-PCR验证效果。分别使用MTT、Transwell、电镜、流式细胞仪等多种技术检测RRP22对星形胶质瘤系U251的细胞生物学影响。结果：与正常脑组织相比,星形胶质瘤中RRP22 mRNA的表达明显降低（p<0.01）。并且,低级别胶质瘤中RRP22的表达明显高于高级别胶质瘤（p<0.01）。但是对于高级别胶质瘤（WHOⅢ及Ⅳ级）,表达没有显著差异性（p>0.05）。将RRP22的表达载体转染U251细胞系后,细胞的生长增殖及迁移能力形成明显受到抑制,并诱导了肿瘤细胞凋亡的发生。结论：1. RRP22基因表达在星形胶质瘤中较正常脑组织中明显下降；2. RRP22基因表达与肿瘤级别（WHO分级）具有相关性；但对于恶性胶质瘤（WHOⅢ及Ⅳ级）,表达没有显著差异。针对其特异性表达于中枢神经系统的特性,提示RRP22可能作为日后诊断星形胶质瘤及其恶性程度的新手段。3. RRP22的表达可导致星形胶质瘤细胞生物学行为的改变,诱导凋亡发生。以RRP22基因为靶点的生物治疗,将为星形胶质瘤治疗提供新的思路。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩写词表
• 引言
• 第一部分:RRP22在人正常脑组织、胶质瘤标本中的mRNA表达及与病理级别的关系
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 2 试验方法
• 3 统计学分析
• 实验结果
• 1 HE染色结果
• 2 Real Time RT-PCR结果
• 讨论
• 结论
• 第二部分:RRP22真核表达载体pZsGreen1-C1-RRP22的构建
• 前言
• 实验材料与设备
• 1 真核表达载体
• 2 RRP22基因模板来源
• 3 主要实验试剂
• 4 主要实验设备
• 5 主要试剂配制
• 实验方法与结果
• 1 RRP22真核表达载体克隆策略
• 2 实验方法与结果
• 讨论
• 结论
• 第三部分:重组载体pZsGreen1-C1-RRP22稳定转染人胶质母细胞瘤细胞株U251
• 前言
• 材料与方法
• 1 主要实验材料与设备
• 2 实验方法
• 实验结果
• 1 荧光显微镜及普通白光显微镜细胞形态对比
• 2 Real time RT-PCR鉴定稳定转染效率
• 讨论
• 结论
• 第四部分:RRP22过量表达对U251细胞生物学影响
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验试剂与仪器
• 2 实验方法
• 实验结果
• 1 MTT法检测细胞生长增殖
• 2 免疫组化观察细胞形态及Ki67表达
• 3 细胞侵袭实验
• 4 细胞周期实验
• 5 电镜观察细胞超微形态改变
• 6 凋亡检测
• 7 线粒体外膜通透性相关蛋白的表达
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 本课题的创新点及目前仍在进行的工作
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 个人简历
• 博士期间发表论文