Fhit和Ki-67在子宫内膜异位症中的表达及意义

论文摘要

【研究背景】从1885年Von Recklinghausen首次提出并命名子宫内膜异位症（Endometriosis,EM）至今,已历时1个多世纪,EM作为“现代病”,已成为生育年龄妇女的多发病、常见病,药物治疗后复发率高,且发病率有逐年增加的趋势。EM虽是良性疾病,但其具有浸润生长、破坏周围组织和种植、远处转移等类似恶性肿瘤的特点,所不同的是异位的子宫内膜细胞维持着正常的增殖、生长,是可控的。EM发病机制尚不完全清楚,传统的病因学说包括子宫内膜种植学说、淋巴及静脉播散学说、体腔上皮化生学说、经血逆流学说等,近年来EM的病因学研究在免疫学机制、遗传易感性、环境因素、细胞凋亡、细胞外基质、血管生成等方面都有较大的进展。目前的研究推测,盆腔EM的发生应有5个关键步骤:内膜细胞黏附到腹膜表面并侵入腹膜间皮细胞层,种植灶部位炎症细胞募集,病灶周围新生血管生成,内膜细胞增殖及异位病灶形成。人子宫内膜移植的动物实验也证实了上述EM的发展过程。研究结果似乎表明:子宫内膜间质细胞通过自分泌、旁分泌方式促进内膜细胞黏附、侵入及炎症细胞募集,进而激发免疫反应而引起“瀑布效应”,最终促进血管生成和细胞增殖。其中子宫内膜间质细胞是这一病理过程中最活跃的细胞。大量证据表明,随经血倒流的子宫内膜间质细胞很可能是EM发生和发展的“源头”,而个体基因差异才是EM患者的易感因素,有谓“不正常子宫内膜”,即国内学者提出的“在位内膜决定论”:不同人（患者与非患者）经血逆流或经血中的内膜碎片能否在“异地”黏附、侵袭、生长,在位内膜是关键,在位内膜的差异是根本差异,是发生EM的决定因素。但是,至今尚没有一种理论可以解释所有种类EM的发病,诚如它的多种临床表现和病理特征。所以,EM的发病更倾向于多种机制、多种因素共同参与的结果。【目的】通过对比正常子宫内膜、EM患者在位子宫内膜和EM患者异位子宫内膜脆性组氨酸三联体（Fhit）和细胞核增殖抗原（ki-67）蛋白的表达情况,以及各组子宫内膜在月经周期不同期别和r-AFS分期不同期别中的表达差异,探讨EM患者子宫内膜细胞在不同状况下的增殖情况以及Fhit在EM发病机制中的作用。【材料和方法】1、2006年3月～2007年9月在我院行手术治疗的卵巢子宫内膜异位症（ovarian endometriosis）患者48例（OEM组）,其中增生期25例,分泌期23例;按r-AFS分期法,Ⅰ～Ⅱ期13例,Ⅲ期21例,Ⅳ期14例。同期子宫腺肌症22例（adenomyosis,AM组）,其中增生期15例,分泌期7例。以上两组均取其在位内膜和异位内膜标本进行检测。以同期单纯子宫肌瘤患者20例为对照组,其中增生期10例,分泌期10例,取其子宫内膜标本进行检测。2、各组标本采用HE染色观察其病理学变化,同时确定各病例在位子宫内膜所处的月经周期。3、采用免疫组化SP法检测各组标本Fhit和ki-67的蛋白表达情况,并以合适的方法对其表达情况进行量化:①Fhit表达的阳性强度以图像分析软件image-pro plus v6.0测得的平均光密度值（mean optical density,MOD）表示,MOD=总光密度/扫描面积;②ki-67表达的阳性强度以增殖指数（proliferation index,PI）表示,PI=阳性细胞数/总细胞数×100%。4、采用SPSS13.0统计软件建立数据库,两组间的均数比较用T检验,其中OEM组和AM组在位内膜和异位内膜之间的比较用配对样本T检验,其余两组间的比较用独立样本T检验;多组间的均数比较采用单因素方差分析或析因设计资料的方差分析,组间两两比较用LSD法;Fhit与Ki-67的相关性用Pearson相关分析。P＜0.05为差异有显著性意义。【结果】1各组子宫内膜中的Fhit表达1.1 Fhit的表达部位:Fhit蛋白主要表达于在位和异位子宫内膜腺体上皮细胞的胞浆和胞膜,在位内膜间质亦有表达,而异位内膜间质则无表达。1.2 Fhit在不同月经周期中的表达差异:对照组和EM组（OEM+AM）在位和异位子宫内膜的Fhit表达在月经周期中均无周期性变化,其MOD在增生期和分泌期均无显著性差异（均P＞0.05）。可见,Fhit蛋白表达与月经周期关系不大,Fhit基因应该不是调节月经周期的主要因子。1.3 Fhit在各组在位内膜中的表达差异:对照组、OEM组、AM组的在位内膜在相同的月经周期内的比较显示,增生期腺体MOD为0.311±0.030 vs 0.295±0.016,0287±0.017（P＜0.05）,间质MOD为0.037±0.006 vs 0.032±0.007,0.031±0.006（P＞0.05）;分泌期腺体MOD为0.326±0.031 vs 0.301±0.020,0.298±0.018（P＜0.05）,间质MOD为0.040±0.006 vs 0.035±0.003,0.034±0.004（P＜0.05）;OEM和AM组在位内膜的Fhit表达无显著性差异（P＞0.05）。EM组的Fhit表达低于对照组,显示EM在位内膜已具有与正常子宫内膜不同的生物学特性。1.4 Fhit在各组在位内膜和异位内膜中的表达差异:增生期OEM组在位内膜腺体与异位内膜腺体比较结果为0.295±0.016 vs 0.192±0.020（t=20.719,P=0.000）,分泌期OEM组在位内膜腺体与异位内膜腺体比较结果为0.301±0.020 vs0.196±0.018（t=19.010,P=0.000）;增生期AM组在位内膜腺体与异位内膜腺体比较结果为0.287±0.017 vs 0.191±0.016（t=15.926,P=0.000）,分泌期AM组在位内膜腺体与异位内膜腺体比较结果为0.298±0.018 vs 0.192±0.017（t=13.803,P=0.000）;OEM和AM组异位内膜的Fhit表达无显著性差异（P＞0.05）。可见,EM患者的子宫内膜异位至非正常部位后,其生物学特性进一步发生改变。1.5 Fhit在r-AFS分期不同期别中的表达差异:OEM组在位内膜的Fhit表达在临床r-AFS分期的不同期别中无显著性差异（F=0.170,P=0.844）,但异位内膜的Fhit表达有显著性差异（F=6.299,P=0.004）,其中Ⅰ～Ⅱ期的Fhit值高于Ⅲ期（0.296±0.024vs 0.297±0.016,P=0.009）和Ⅳ期（0.296±0.024 vs 0.300±0.016,P=0.001）。提示EM在位内膜的生物学特性改变与EM的发生有关,但与EM的发展关系不大,而EM异位内膜生物学特性的改变与EM的进展明显相关。2各组子宫内膜中的ki-67表达2.1 ki-67的表达部位:ki-67主要表达在子宫内膜腺体上皮细胞的细胞核,在位内膜间质有较弱表达,异位内膜间质无表达。2.2 ki-67在不同月经周期中的表达差异:对照组子宫内膜和EM在位子宫内膜ki-67的表达有周期性变化,增生期ki-67增殖指数PI均显著高于分泌期（均P＜0.05）。而EM异位子宫内膜ki-67的表达无周期性变化,PI在增生期和分泌期无显著性差异（均P＞0.05）。可见,在位子宫内膜细胞的增殖能力是呈周期性变化的,而异位子宫内膜细胞的增殖能力则失去了这种周期性变化,呈一种持续活跃的状态。2.3 ki-67在各组在位内膜中的表达差异:对照组和OEM组、AM组在位内膜的ki-67表达在增生期无显著性差异（均P＞0.05）,在分泌期三组间亦无显著性差异（均P＞0.05）。显示EM在位内膜的细胞增殖能力与正常子宫内膜相当。2.4 ki-67在各组在位内膜和异位内膜中的表达差异:EM组异位子宫内膜的ki-67表达在增殖期弱于自身在位内膜,其中OEM组在位内膜与异位内膜比较为66.03±5.60 vs 9.35±1.26（t=49.149,P=0.000）;AM组在位内膜与异位内膜比较为63.50±5.22 vs 9.26±1.51（t=38.659,P=0.000）。但在分泌期EM组异位子宫内膜的ki-67表达强于其自身在位内膜,其中OEM组在位内膜与异位内膜比较为5.01±0.94 vs 8.92±1.11（t=12.327,P=0.000）;AM组在位内膜与异位内膜比较为5.13±0.87 vs 8.75±1.24（t=6.323,P=0.000）;OEM和AM组异位内膜的ki-67表达无显著性差异（P＞0.05）。说明异位子宫内膜的增殖能力在分泌期仍处于相对活跃状态。2.5 ki-67在r-AFS分期不同期别中的表达差异:OEM在位子宫内膜的ki-67表达在不同r-AFS分期中无显著性差异（均P＞0.05）,但OEM异位子宫内膜的ki-67表达在不同r-AFS分期有显著性差异（增生期和分泌期分别F=4.682,P=0.020和F=4.149,P=0.031）,Ⅰ～Ⅱ期的ki-67表达高于Ⅲ、Ⅳ期（P＜0.05）。显示处于不同临床分期的异位子宫内膜细胞的增殖能力有所差异。3 Fhit与ki-67表达的相关性:EM组在位子宫内膜的Fhit与ki-67表达之间无明显相关性（r=0.171,P=0.245）;但其异位子宫内膜的Fhit与ki-67表达之间存在有统计学意义的正相关（r=0.301,P=0.038）。可见,异位子中内膜的Fhit表达对其细胞增殖有明显的影响。【结论】1、异位的子宫内膜的Fhit表达和ki-67表达较在位内膜发生了明显的改变,这种改变可能在EM的发生、发展过程中起重要作用。2、对照组子宫内膜的Fhit表达高于EM组在位内膜,表明EM在位内膜已具有与正常子宫内膜不同的生物学特性,显示在位内膜的改变是发生EM的重要因素,支持“在位内膜决定论”的观点。3、月经周期是一个子宫内膜细胞增殖能力发生周期性变化的过程,异位子宫内膜的增殖能力失去周期性变化,呈一种持续活跃的状态,这可能是其能够异位生长的原因之一。4、Fhit和ki-67表达在不同的临床r-AFS分期患者的在位内膜中表达无显著性差异,提示在位内膜的生物学特性改变虽然与EM的发生有关,但与EM的发展关系不大;而EM异位内膜生物学特性的改变不仅与EM的发生有关,而且与EM的进展也明显相关;EM的进展应该主要是由于异位内膜异位至非正常部位后自身的生物学特性发生改变而导致的。5、Fhit和ki-67表达在EM在位子宫内膜无明显相关性,但在EM异位内膜呈正相关,表明Fhit对EM在位子宫内膜细胞的增殖影响不大,但对EM异位子宫内膜细胞的增殖有明显的影响。【全文小结】本研究采用免疫组化SP法测定了子宫肌瘤患者子宫内膜和EM患者子宫内膜的Fhit和ki-67的表达,对比了相同的月经期别中各组在位内膜之间的表达差异、在位内膜与异位内膜之间的表达差异、各组子宫内膜在不同的月经周期中的表达差异以及OEM组不同r-AFS分期之间的表达差异。结果显示:对照组和EM组在位内膜、异位内膜的Fhit表达在月经周期中均无周期性变化;组间比较显示Fhit表达强弱顺序为:对照组子宫内膜＞EM组在位内膜＞EM组异位内膜;OEM组在位内膜的Fhit表达在临床r-AFS分期的不同期别中无显著性差异,但异位内膜的Fhit表达有显著性差异。对照组子宫内膜和EM在位子宫内膜ki-67的表达有周期性变化,增生期ki-67增殖指数高于分泌期;EM异位子宫内膜ki-67的表达无周期性变化;EM在位子宫内膜的ki-67表达与对照组无显著性差异;EM异位子宫内膜的ki-67表达在增殖期弱于自身在位内膜,但在分泌期强于其自身在位内膜OEM在位子宫内膜;ki-67表达在不同r-AFS分期中无显著性差异,但OEM异位子宫内膜的ki-67表达在不同r-AFS分期有显著性差异。EM组在位子宫内膜的Fhit与ki-67表达之间无明显相关性;但其异位子宫内膜的Fhit与ki-67表达之间存在正相关。以上结果表明:EM在位内膜已具有与正常子宫内膜不同的生物学特性,异位子宫内膜的Fhit表达和细胞增殖状况进一步发生了明显的改变,提示Fhit表达和子宫内膜细胞Ki-67的改变可能在EM的发生、发展过程中起重要作用。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 结论
• 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 论文附图
• 缩略语中英文对照表
• 综述:Fhit和ki-67与子宫内膜异位症
• 攻读学位期间的发表的学术论文
• 致谢
• 研究生毕业论文统计学审稿证明