壳聚糖在小鼠体内的组织分布与排泄研究

论文摘要

壳聚糖是自然界中唯一的天然碱性多糖,具有良好的生物相容性和可降解性,已有大量文献报道其具有降血脂、抗癌、提高免疫力等多种生理功效,目前壳聚糖在国内外医药领域得到了广泛关注,但是其在体内的代谢途径尚不清楚。本论文中,采用荧光物质对壳聚糖进行标记之后,研究了壳聚糖在小鼠体内组织中的分布和排泄,并探讨了其在体内的代谢途径。本研究为壳聚糖药代动力学的研究打下重要基础,为其进一步应用于医药提供了重要依据,具有极大的学术意义和经济意义。用异硫氰酸荧光素在不同的反应条件下对分子量50万、脱乙酰度为90%的壳聚糖进行标记。实验结果表明,标记反应的pH值和温度对壳聚糖的标记率影响较明显,标记率分别随着反应溶液pH值和温度的升高而增大;反应时间对标记率影响较小。实验确定标记的条件为25℃,pH9.0下反应3 h,可制得标记率为1.21%的异硫氰酸荧光素标记壳聚糖（FITC-CIS）。采用上述方法制备得到的FITC-CIS给小鼠进行灌胃给药,随后在不同的时间点检测FITC-CIS在体内的分布情况。实验表明,检测方法适用于FITC-CIS在动物体内的药动学研究;FITC-CIS主要分布在小鼠肝、肾和肺中,其中在肾脏中含量最高,在心、脾和血清中含量较低;在胃中停留时间的延长证明了壳聚糖能增加饱腹感;实验检测到肠内容物中含量相对其它部位含量高很多,说明壳聚糖主要经肠道直接排泄。将制备的FITC-CIS给小鼠灌胃给药后,在各时间段收集小鼠的粪尿进行荧光检测,并用HPLC分析代谢物。实验表明FITC-CIS主要经肠道以原药形式从粪便排泄,部分壳聚糖在体内降解后从尿液中排泄出,排泄浓度都在6 h达到最大值。本论文的研究确定了分子量50万、脱乙酰度为90%的壳聚糖的荧光标记条件,采用荧光分光光度计测定和HPLC分析相结合的方法,研究了壳聚糖在小鼠体内的分布和排泄情况,并阐述了壳聚糖的代谢途径,对其进一步的研究具有指导意义。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 绪论
• 1.1 壳聚糖的结构、性质和应用
• 1.1.1 壳聚糖的结构与性质
• 1.1.2 壳聚糖的应用
• 1.2 国内外研究进展
• 1.2.1 药物代谢研究的新技术
• 1.2.2 荧光标记法应用于壳聚糖药代动力学的研究进展
• 1.2.3 壳聚糖在体内药代的研究进展
• 1.3 课题目的和意义
• 1.4 课题的研究内容
• 第二章 壳聚糖荧光标记条件的确定
• 2.1 前言
• 2.2 材料
• 2.2.1 实验试剂
• 2.2.2 实验仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 FITC 标准曲线的制备
• 2.3.2 壳聚糖的标记
• 2.3.3 标记率的测定
• 2.3.4 pH 对标记率的影响
• 2.3.5 温度对标记率的影响
• 2.3.6 时间对标记率的影响
• 2.3.7 FTIC-CIS 的色谱分析
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 FITC 标准曲线
• 2.4.2 pH 值对标记率的影响
• 2.4.3 温度对标记率的影响
• 2.4.4 反应时间对标记率的影响
• 2.4.5 壳聚糖的标记
• 2.4.6 FTIC-CIS 的色谱分析
• 2.5 小结
• 第三章 小鼠灌胃FITC-CIS 后的组织分布研究
• 3.1 前言
• 3.2 实验材料
• 3.2.1 原料及实验动物
• 3.2.2 实验试剂
• 3.2.3 实验仪器
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 方法学确证
• 3.3.2 动物实验
• 3.3.3 生物样品处理
• 3.3.4 数据处理
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 方法学结果
• 3.4.2 壳聚糖体内各脏器组织分布测定
• 3.4.3 FITC-CIS 口服后在消化道内容物中的分布
• 3.5 小结
• 第四章 小鼠灌胃FITC-CIS 后的尿粪排泄研究
• 4.1 前言
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 原料及实验动物
• 4.2.2 实验试剂
• 4.2.3 实验仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 方法学确证
• 4.3.2 动物实验
• 4.3.3 生物样品处理
• 4.3.4 色谱分析
• 4.3.5 FITC 对壳聚糖体内代谢的影响
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 样品标准曲线
• 4.4.2 回收率
• 4.4.3 精密度
• 4.4.4 稳定性
• 4.4.5 小鼠灌胃壳聚糖排泄测定
• 4.4.6 色谱结果
• 4.5 小结
• 第五章 结论与展望
• 一、主要结论
• 二、论文的应用价值
• 三、存在的问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文