论文摘要
研究背景宫颈病变是女性下生殖道最为常见的病变,其中主要包括宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia ,CIN）和宫颈癌。宫颈上皮内瘤变是Richart于1997年首先提出,指宫颈上皮不典型增生和原位癌,即所谓宫颈癌前病变。从宫颈开始出现病变到发展为宫颈癌是一个较为长时间连续发展的过程,即所谓的癌前病变过程,所以早发现,早治疗,对预防宫颈癌的发生发展起着重要的作用。随着分子生物学的迅速发展,人们认识到人类宫颈癌的形成和演变是多基因共同作用的复杂进程。现在对于宫颈癌有关的基因研究较多的有p53,p27,p16,癌基因C-erbβ-2,C-myc,bcl,凋亡抑制因子survivin,p21,p16等。目前,对于宫颈病变的的诊断以及治疗主要依赖病理学检查结果,所以寻找宫颈病变过程中的生物学标记物成为确诊和治疗的一个重要目标。p73基因是近年来开始研究的肿瘤相关基因。p73基因是1997年由Kaghad在研究胰岛素信号介质连接区时偶然发现的。其用荧光原位杂交技术发现p73定位于人类恶性肿瘤发生的热点区域,推测p73基因可能为抑癌基因。在p73基因蛋白结构中发现其转录激活区,DNA结合区,寡聚功能区与p53有很大程度的相似,故将其归为p53家族。但p73蛋白结构的羧基端与p53蛋白结构不同,使得p73基因与p53基因在功能方面又有差异。也因此成为近年来的研究热点。关于p73在乳腺癌,肺癌,消化道肿瘤中的相关研究也已见报道。但p73在宫颈病变中的研究报道不多见。本实验旨在对p73在宫颈病变中的作用做一初步探索。P16蛋白是1994年由Kamb等报道的一种新型抑癌基因.位于人类的9号染色体92P1区。p16基因失活将导致细胞增殖失控。研究证实肿瘤抑制基因启动子区域5′CpG岛甲基化是导致转录水平上基因失活的重要机制。目前已有报道在卵巢癌、食管癌、乳腺癌、肺癌、骨肉瘤、胃癌、胰腺癌、胆囊癌、前列腺癌、头颈部恶性肿瘤等均有p16基因的失活。p16基因在人类多种原发肿瘤和细胞系中主要表现为纯合子缺失或突变失活,这意味着P16的表达降低。但是在宫颈癌中pl6基因的失活与p16的表达却很复杂。究其原因可能是由于高危型人乳头状瘤病毒（HPV）表达的E7蛋白可以与pRb蛋白结合并使之失活,而失活的Rb基因可以反馈性刺激p16表达水平升高。Salit在探讨宫颈鳞癌高危HPV和p16表达的关系中发现,p16与HPVl6/18表达呈正相关,说明p16的过表达是继发于HPV表达的,提示p16蛋白表达异常是肿瘤发生的早期事件。目前,p73,p16在宫颈病变中的作用报道不多,两者在宫颈病变中的关系及联合检测的价值,国内外尚无相关报道。目的检测子宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithial neoplasia,CIN）组织中,宫颈癌组织中p73和p16的表达情况,初步探讨二者在宫颈病变中的作用及相互关系。方法采用13例正常宫颈作为对照组,应用免疫组化法检测55例宫颈上皮内瘤变（CIN）,32例宫颈鳞癌组织中P73、Pl6的表达。结果（1） p73主要表达于细胞核。在正常宫颈组织,宫颈上皮内瘤变,宫颈癌中的表达阳性率分别为92.3%（12/13）, 76.4%%（42/55）,40.6%（13/32）。CIN组织中阳性表达率明显低于正常宫颈组织（χ2=10.001,P=0.002。P<0.05）,宫颈癌组织表达阳性率明显低于CIN组织,差异有统计学意义（χ2=11.112,P=0.001。P<0.05）。（2） p16主要表达于细胞浆。在正常宫颈组织,宫颈上皮内瘤变,宫颈癌组织中的表达阳性率分别为15.4%（2/13）, 40.0%（23/55）, 78.0%（25/32）。CIN组织中阳性表达率明显高于正常宫颈组织,差异有显著性（χ2=15.162,P=0.000。P<0.05）;宫颈癌组织中表达阳性率明显高于CIN组,差异有统计学意义（χ2=6.722,P=0.01。（P<0.05））。（3） p73在CINI、CINII、CINIII组织中的阳性表达率分别为85.7%（18/21）, 72.2%（13/18）, 68.8%（11/16）。三组的表达阳性率差异无显著性（P>0.05）。（4） p16在CINI、CINII、CINIII组织中的阳性表达率分别为14.3%（3/18）,44.4%（8/13）, 68.8%（12/16）。三者比较差别有统计学意义（P<0.05）。（5）通过相关分析,p73和p16在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的表达相关性r=-0.901;P=0.037 （P<0.05）。结论1) p73在正常宫颈组织,宫颈上皮内瘤变,宫颈癌中的阳性表达率逐渐降低。在宫颈癌组织中的表达明显低于正常宫颈组织和宫颈上皮内瘤变组织。进一步支持P73可能是宫颈肿瘤的抑癌基因。2) p16在正常宫颈组织,宫颈上皮内瘤变和宫颈癌中的阳性表达率表达逐渐升高。在宫颈癌组织中的阳性表达率明显高于正常宫颈组织和宫颈上皮内瘤变组织。推测P16可能是宫颈肿瘤的致癌基因。3) p73和p16在宫颈病变中的表达呈负相关,p16可能通过拮p73的抑癌作用,来发挥其致癌作用,二者共同参与了宫颈癌的发生发展过程。