特发性智力低下患者染色体亚端粒区微小结构异常分析

论文摘要

目的：智力低下（mental retardation, MR）是一类常见的神经发育障碍性疾病,智力低下发病率高,在人群中发生率约3%。染色体亚端粒区微小结构异常是引起特发性智力低下的重要原因,而以往的检测技术存在很大的缺陷。本研究探讨多重连接依赖的探针扩增（multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA）技术在特发性MR患者临床检测中的应用。方法：选取25例已知正常或染色体异常的病例,提取其外周血基因组DNA,应用荷兰MRC-Holland公司的P070型MLPA亚端粒探针试剂盒,样本DNA经变性、杂交、连接、扩增等步骤,其产物通过ABI公司3700型测序仪毛细管电泳技术分离,软件分析,将MLPA检测结果与已知核型对照,确定MLPA技术的可信性。在此基础上,应用MLPA检测118例特发性MR患者,对于MLPA检出染色体异常的病例,通过荧光原位杂交（fluorescence insitu hybridization, FISH）等技术进行验证。结果：通过优化DNA质量,调整DNA的用量、DNA的变性时间、PCR反应的条件、毛细管电泳时间与电压等,应用MLPA技术检测25例标本均得到明确的结果,与其它技术分析分析结果一致。应用MLPA技术检测特发性MR患者,发现6例染色体亚端粒区异常的病例：分别为1p36.3区域缺失、1p部分重复、15q部分缺失、15q部分重复、22q部分缺失、12q部分缺失合并17p部分重复。用FISH技术对这些病例进行验证,得到了一致的结果。结论：MLPA技术为智力低下的病因学分析提供了有价值的诊断手段,为对智力低下患者的遗传咨询及预防复发风险提供了依据。这6例染色体亚端粒区微小异常患者的发现,为我们进一步研究表型与基因型的关系、寻找智力低下疾病基因提供了新材料。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 缩写词中英文对照简表
• 前言
• 实验基本流程
• 第一章 MLPA技术平台的建立
• 1 材料
• 1.1 病例材料
• 1.2 实验试剂
• 1.3 仪器与设备
• 2 方法
• 2.1 染色体常规G显带及高分辨显带技术
• 2.2 抽提外周血全基因组DNA
• 2.3 多重连接依赖的探针扩增技术
• 2.4 荧光原位杂交技术
• 2.5 比较基因组杂交技术
• 3 结果
• 3.1 正常男性核型图与MLPA分析图
• 3.2 47,XX+21患者患者的核型图与MLPA分析图
• 3.3 15,16号染色体重复的绒毛标本CGH、FISH及MLPA检测图
• 3.4 核型为46,XY,del（9）（p22）的核型图,MLPA分析及FISH验证图
• 3.5 核型为47,XX,+mar的核型图,MLPA分析图与FISH验证图
• 4 讨论
• 5 结论
• 第二章 应用MLPA技术检测智力低下患者的染色体亚端粒区异常
• 1 材料
• 1.1 病例材料
• 1.2 实验试剂、仪器与设备
• 2 方法
• 2.1 染色体常规G显带及高分辨显带技术
• 2.2 抽提外周血全基因组DNA
• 2.3 多重连接依赖的探针扩增技术
• 2.4 荧光原位杂交技术
• 2.5 Real-time PCR
• 3 结果
• 3.1 通过MLPA技术发现一例1p36微缺失患者
• 3.2 通过MLPA技术发现一例1p36微重复患者
• 3.3 通过MLPA技术发现一例15q11.2微缺失患者
• 3.4 通过MLPA技术发现一例15q微重复患者
• 3.5 通过MLPA技术发现一例22q13微缺失综合征患者
• 3.6 通过MLPA技术发现一例12q微缺失并17p微重复患者
• 4 讨论
• 5 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读硕士学位期间主要研究成果
• 个人简历