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苜蓿皂苷的提取纯化与生物活性评价

2020-12-06阅读(296)

苜蓿皂苷的提取纯化与生物活性评价

论文摘要

苜蓿皂苷是苜蓿属植物中含有的一类重要的生物活性物质,近年的研究表明,苜蓿皂苷具有显著的降血脂和抗动脉粥样硬化等生理功能,具有很高的药用价值和开发前景。因此,本研究以紫花苜蓿为原料,对其提取纯化及生物活性进行了研究,为苜蓿资源的进一步开发利用提供依据。本研究的主要试验内容和结果如下:以比色法作为测定苜蓿总皂苷含量的方法,齐墩果酸（Oleanolic Acid,OA）为对照品,筛选出香草醛-高氯酸作为显色体系,经紫外扫描,得其最大吸收波长为560nm,得标准曲线方程为:y=0.1453x-0.0071,相关系数R2=0.9993,其精密度试验的RSD=0.42%,加标回收率为98.3%,其RSD=3.88%,该方法快捷、精确、重现性良好。试验通过对热醇法和超声波辅助法提取的研究,分别得出了提取的最佳工艺参数:（1）热醇提取。在参考文献中乙醇提取最佳工艺的基础上,通过L9（34）正交实验,得出了热醇法提取的适宜工艺参数为:浸提温度80℃、浸提时间1.5h、乙醇浓度70%、固液比1:20时TAS的得率最高,平均为1.472%,RSD（%）=1.58%。（2）超声波辅助提取。考察了乙醇浓度、超声时间、固液比对TAS得率的影响,乙醇浓度70%、超声时间30min,固液比1:10,TAS得率为2.025%,RSD（%）=4.19%。对两种提取方法的提取率进行比较,得出超声波辅助法比热醇法的提取率高37.57%,超声波技术用于TAS的提取是有效可行的。试验以TAS的静态吸附量、洗脱率和精制度为考察指标,研究了大孔吸附树脂富集、纯化TAS的吸附性能和洗脱参数,并确定了影响纯化效率不同因素的最佳工艺参数,得出了最佳的上样和洗脱条件:筛选出的最适树脂型号为DM-130型。DM-130型树脂的最佳吸附条件为:溶液pH值为5,上样液浓度为812mg/mL,上样液流速为2BV/h;最佳解吸条件为:解吸液流速为2BV/h,解吸液温度为60℃,色谱柱的径高比1:8,先用4BV的水以2BV/h流速洗脱后,再以4BV的50%的乙醇溶液以2BV/h的流速洗脱,可较好的分离TAB。将提取纯化出的TAS进行生物活性研究时发现:（1）通过还原力试验,得出TAS具有清除游离基的活性,且还原力的大小和TAS的浓度呈现线性关系:（2）TAS具有清除DPPH游离基的作用,不同浓度TAS溶液对DPPH的清除作用不同,也表现出一定的浓度效应。综上所述,采取超声波辅助醇法提取,利用大孔吸附树脂富集纯化,这些技术和方法可以有效提高TAS这一有效成分的提取率和纯度;通过对TAS体外还原力试验和清除DPPH游离基的试验,初步判断,TAS对DPPH游离基具有一定的清除效果。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 1 引言
  • 1.1 苜蓿（MEDICAGO SATIVA）
  • 1.2 紫花苜蓿的特征
  • 1.2.1 紫花苜蓿的营养组成
  • 1.2.2 紫花苜蓿的中药学特征
  • 1.2.3 苜蓿含有的其他活性物质及生理活性
  • 1.2.4 苜蓿在食品和保健品中的应用
  • 1.3 皂苷（SAPONINS）
  • 1.3.1 皂苷的组成结构和理化性质
  • 1.3.2 一些主要皂苷的生理活性
  • 1.3.3 苜蓿皂苷（ALFALFA SAPONIN）
  • 1.4 皂苷的提取与纯化
  • 1.4.1 皂苷的提取方法
  • 1.4.2 大孔吸附树脂对苜蓿皂苷的纯化富集
  • 1.5 皂苷的检测
  • 1.5.1 皂苷的定性检测
  • 1.5.2 皂苷的定量分析方法
  • 1.6 苜蓿皂苷生理活性的研究
  • 1.6.1 自由基及其危害
  • 1.6.2 自由基的清除剂
  • 1.7 研究内容、目的和意义
  • 2 材料与方法
  • 2.1 实验材料与仪器设备
  • 2.1.1 实验材料和化学试剂
  • 2.1.2 仪器与设备
  • 2.2 实验方法
  • 2.2.1 原料的采集和预处理
  • 2.2.2 紫花苜蓿成分的分析
  • 2.2.3 齐墩果酸标准溶液的制备及标准曲线的绘制
  • 2.2.4 苜蓿皂苷的定性分析
  • 2.2.5 苜蓿皂苷的提取
  • 2.2.6 苜蓿皂苷的纯化
  • 2.3 苜蓿皂苷的生物活性测定
  • 2.3.1 还原力测定
  • 2.3.2 皂苷的清除DPPH 自由基能力测定
  • 3 结果与分析
  • 3.1 紫花苜蓿中主要成分的分析
  • 3.2 苜蓿皂苷的定量检测
  • 3.2.1 显色体系的选择与干扰试验
  • 3.2.2 齐墩果酸标准曲线的绘制及线性方程的建立
  • 3.2.3 显色体系的稳定性实验
  • 3.2.4 精密度试验结果
  • 3.2.5 重现性试验结果
  • 3.2.6 加样回收率试验结果
  • 3.3 苜蓿皂苷的定性分析
  • 3.4 不同提取次数对苜蓿皂苷提取效率的影响
  • 3.5 苜蓿皂苷醇法提取的结果
  • 3.5.1 醇法提取的正交试验结果
  • 3.5.2 醇法提取的验证试验的结果
  • 3.6 苜蓿皂苷超声波辅助醇法提取的实验结果
  • 3.6.1 单因素试验
  • 3.6.2 超声波辅助提取的正交试验
  • 3.6.3 超声波辅助提取的验证试验结果
  • 3.6.4 TAS 超声醇提与常规醇提提取效率的比较
  • 3.7 苜蓿皂苷的纯化
  • 3.7.1 大孔吸附树脂型号的筛选
  • 3.7.2 大孔吸附树脂静态解吸的动力学试验结果
  • 3.7.3 大孔吸附树脂动态吸附条件的优化
  • 3.7.4 动态解吸条件的优化
  • 3.7.5 验证试验
  • 3.8 苜蓿皂苷的生物活性
  • 3.8.1 还原能力的测定结果
  • 3.8.2 苜蓿皂苷清除DPPH 自由基能力的测定结果
  • 4 讨论
  • 4.1 测定方法的选择和显色体系的确定
  • 4.1.1 测定方法的选择
  • 4.1.2 显色体系的确定
  • 4.2 两种提取方法的比较
  • 4.2.1 超声波辅助提取的优势
  • 4.2.2 超声波技术在植物活性成分提取中的应用
  • 4.2.3 影响超声波辅助提取效率因素的分析
  • 4.3 TAS 的纯化
  • 4.3.1 大孔吸附树脂的选择
  • 4.3.2 大孔吸附树脂的预处理及再生
  • 4.3.3 影响大孔吸附树脂分离纯化的因素
  • 4.4 TAS 的生物活性研究
  • 4.4.1 还原力试验
  • 4.4.2 清除DPPH 游离基试验
  • 5 结论
  • 5.1 显色体系的选择及显色条件的确定
  • 5.2 rTAS的提取
  • 5.3 rrAS的分离纯化
  • 5.4 TAS的生物活性研究
  • 致谢
  • 参考文献
  • 攻读硕士期间发表的学术论文

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