槟榔碱体外代谢的实验研究

论文摘要

目的通过建立槟榔碱体外代谢体系比较SD大鼠不同器官及肝脏组分槟榔碱代谢能力,探索槟榔碱主要代谢酶的分布以及代谢特征,并通过加入抑制剂以及组分提纯等方法确定代谢酶。为进一步研究槟榔碱毒性机制和代谢机制的毒理学意义提供实验依据。方法制备SD大鼠器官匀浆,收集血液；差速离心法分离肝亚细胞组分；利用等密度梯度离心法提纯线粒体；建立反应体系,采用离子对RP-HPLC法检测槟榔碱,并结合酶抑制剂比较各器官、组分及线粒体提纯前后槟榔碱代谢能力。结果1.离子对RP-HPLC法检测槟榔碱,含量与峰值呈良好线性关系。2.槟榔碱的代谢酶在SD大鼠体内广泛存在,尤其以肝脏,血液丰富。槟榔碱代谢酶分布于SD大鼠肝细胞内各亚细胞组分。3.槟榔碱体外代谢符合酶促反应特征,肝细胞中能代谢槟榔碱的酶主要分布于溶酶体,线粒体与微粒体。4.羧酸酯酶活性与一定范围内TPP剂量负相关,微量TPP（0.5nmol/ml）即可阻断羧酸酯酶槟榔碱代谢。结论1.离子对RP-HPLC法检测槟榔碱精确性与准确度均达到要求。2.槟榔碱体外代谢是酶促反应,虽然在不同的器官与组织,以及肝亚细胞组分中其代谢酶的活力有所不同,但代谢酶组成基本一致。3.羧酸酯酶可能是槟榔碱肝脏中代谢的主要代谢酶。4.TPP对羧酸酯酶槟榔碱代谢具有强大的干扰作用,可作为研究槟榔碱代谢与毒性关系的重要工具。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 受试动物
• 2.2 主要试剂
• 2.3 主要试剂配制
• 2.4 主要仪器
• 2.5 主要实验方法
• 2.6 数据处理与分析
• 第三章 实验结果
• 3.1 离子对RP-HPLC法检测槟榔碱代谢体系中槟榔碱的含量
• 3.2 SD大鼠不同组织匀浆槟榔碱代谢的比较
• 3.3 SD大鼠肝脏不同亚细胞组分代谢槟榔碱的比较
• 3.4 羧酸酯酶在槟榔碱代谢中的作用
• 3.5 大鼠肝组织线粒体的提纯与代谢能力比较
• 第四章 分析与讨论
• 4.1 离子对RP-HPLC法用于分析槟榔碱代谢的可行性
• 4.2 大鼠不同器官匀浆代谢能力的探讨
• 4.3 大鼠肝匀浆各组分代谢槟榔碱能力的比较
• 4.4 槟榔碱代谢特征探讨
• 4.5 槟榔碱代谢酶的探讨
• 4.6 大鼠肝脏亚细胞组分羧酸酯酶活性检测及抑制试验
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间发表的论文及研究成果