猫泛白细胞减少症病毒VP2基因在重组杆状病毒中的表达及其免疫原性研究

论文摘要

猫泛白细胞减少症是由猫泛白细胞减少症病毒（Feline panleukopenin virus,FPV）引起的一种急性高度接触性传染病。在自然状态下,FPV能感染几乎所有的猫科、鼬科及浣熊科动物,引起猫、水貂、浣熊等动物很高的死亡率,对野生动物和特种经济动物构成极大的威胁。目前,控制该病的主要手段是进行免疫接种。为了有效地控制该病的发生和流行,迫切需要研制安全、稳定、高效的新型FPV疫苗。病毒样颗粒（VLPs）和病毒颗粒具有相似的免疫原性。而且VLPs无法自我复制,不会发生基因恢复性突变、重组和重排,优于灭活和减毒病毒疫苗。本研究利用杆状病毒表达系统能够有效表达外源基因且无细胞毒性,同时能转染离体和在体的分裂和非分裂细胞等特点,进行了FPV病毒样颗粒制备研究。本研究主要根据测得的猫泛白细胞减少症病毒（FPV）GT-2株VP2蛋白全长基因序列,设计1对特异性引物,以GT-2毒株为模板,PCR扩增VP2基因片段（去除终止密码子）,与转座载体pFastBacI连接,构建重组质粒pFastBac-VP2,并进行测序鉴定,鉴定正确后,转化到含有辅助质粒的大肠杆菌DH10Bac中,将目的基因定向插入到Bacmid质粒中,经蓝白斑筛选后获得重组Bacmid-VP2转染Sf9昆虫细胞,重组Bacmid-VP2在昆虫细胞中获得了包装,形成了大量的病毒粒子;VP2蛋白得到了表达并形成了FPV病毒样颗粒。直接免疫荧光实验证明,FPV VP2蛋白在重组杆状病毒中获得了表达。利用双抗体夹心ELISA法检测病毒样颗粒的表达量,结果表明目的基因在昆虫细胞中获得了较高水平的表达。将表达蛋白作抗原制备疫苗免疫小鼠,经抗体测定证明,表达的重组蛋白能诱导机体产生特异性免疫应答。本研究为FPV亚单位疫苗的研制奠定了物质基础。

论文目录

• 内容提要
• 前言
• 第一篇 文献综述
• 第1章 猫泛白细胞减少症病毒的研究进展
• 1.1 猫泛白细胞减少症病毒的形态与基因组
• 1.2 FPV 的抵抗力
• 1.3 FPV 的培养特性
• 1.4 FPV 衣壳蛋白
• 1.5 VP2 蛋白的空间构象
• 1.6 FPV 非结构蛋白
• 1.7 血凝性
• 1.8 FPV 的流行病学
• 1.9 FPV 疫苗的研究现状
• 第2章 杆状病毒作为表达载体系统的研究进展
• 2.1 杆状病毒的形态
• 2.2 杆状病毒作为表达载体的优点
• 2.3 杆状病毒表达载体系统种类
• 2.4 启动子
• 2.5 杆状病毒转移载体的发展
• 2.6 杆状病毒能够有效转染哺乳动物细胞
• 2.7 杆状病毒介导外源性基因在哺乳动物细胞中的表达
• 2.8 杆状病毒表达系统的应用
• 第二篇 研究内容
• 第1章 猫泛白细胞减少症病毒多克隆荧光抗体的制备
• 摘要
• 1.1 材料与方法
• 1.2 结果
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 第2章 猫泛白细胞减少症病毒VP2 基因在重组杆状病毒中的表达及其免疫原性研究
• 摘要
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第3章 猫泛白细胞减少症VP2基因重组杆状病毒表达产物的小鼠免疫研究
• 摘要
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 详细摘要
• 英文摘要
• 导师简介
• 作者简介