力达霉素诱导细胞裂亡的分子机制研究

论文题目: 力达霉素诱导细胞裂亡的分子机制研究

论文类型: 博士论文

论文专业: 微生物与生化药学

作者: 梁越欣

导师: 李电东,柳惠图

关键词: 力达霉素,抗肿瘤抗生素,细胞裂亡,细胞凋亡,细胞衰老,细胞周期,中心体

文献来源: 中国协和医科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 力达霉素(Lidamycin，LDM)又称C1027，是一种烯二炔类(enediyne)抗生素。它以其强烈的杀伤肿瘤细胞的活性和独特的切割DNA方式而备受重视。LDM分子由一个发色团和一个酸性的辅基蛋白非共价结合而组成。发色团是LDM的活性部分，能够引起DNA分子断裂，该作用具有核苷酸和序列的特异性；辅基蛋白起保护作用。以往的研究表明，LDM既能在体内外强烈的抑制肿瘤生长、抗肿瘤转移，又具有一定的抗病毒作用。LDM因其突出的临床应用前景而值得深入研究。细胞裂亡即有丝分裂性细胞死亡(mitotic cell death)，在肿瘤治疗中已渐受关注，其精确机制尚不清楚。我们曾经报道过LDM在低浓度下可诱导人肝癌BEL-7402细胞和人乳腺癌MCF-7细胞裂亡。本文的研究目的在于探索LDM诱导细胞裂亡的分子机制及其可能的信号转导通路。我们用低浓度LDM(0.1 nmol／L和0.5 nmol／L)分别处理人肝癌BEL-7402细胞和正常人肝L-02细胞2 h，发现LDM能够明显的诱导BEL-7402细胞和L-02细胞发生裂亡，其主要特征为：细胞体积增大、发生G2-M期阻断、出现多核化等。用MTT法测定生长曲线，发现与不加药的对照组细胞相比，加药组细胞生长速率均明显降低，细胞倍增时间延长，增殖受到抑制。低浓度LDM处理细胞后72 h，用Hoechst33342和PI联染观察到一种与典型凋亡不同的染色质凝集方式：核膜一直保持完整，细胞仍贴壁，染色质呈散点状凝集，不形成凋亡小体。琼脂糖凝胶电泳检测不到DNA梯带。流式细胞术也检测不到凋亡相关的“亚G1峰”。用Giemsa染色发现，加入低浓度LDM培养2 h，BEL-7402细胞于撤药后12 h出现多核化细胞，而L-02细胞出现多核化现象要比其滞后大约36 h。多核化细胞的形态各异，LDM作用下多核化的BEL-7402细胞微核数可达12-15个；而LDM引起的L-02细胞多核化一般不超过10个微核。0.5 nmol／L LDM作用后72 h，BEL-7402细胞和L-02细胞的多核化比例分别达到35.7％和14.1％，G2-M期阻滞分别达23.7％和60.9％。有丝分裂指数检测表明，在低浓度LDM作用下两种细胞的M期细胞百分数均明显增加。线粒体膜电位的检测结果显示，经低浓度LDM作用后，发生裂亡的细胞线粒体膜电位并未下降。细胞间接免疫荧光实验首次发现，低浓度LDM作用后细胞的中心体过复制，多极有丝分裂纺锤体形成。线粒体信号转导通路是凋亡的主要通路之一，Western blotting结果显示其在裂亡过程中未被激活。这些结果提示，经力达霉素诱导所致的BEL-7402细胞和L-02细胞裂亡与中心体过复制有关，并且不依赖于线粒体通路。异常的中心体导致多极有丝分裂纺锤体形成，进而引发染色体的不均等分配和以多核化或微核化大细胞为特

论文目录:

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前言

材料与方法

结果

讨论

结论

参考文献

文献综述

研究计划

附录

致谢

附件

发布时间: 2006-10-13

参考文献

[1].PI3K抑制剂ZSTK474抗白血病的作用及机理研究[D]. 周千翔.天津医科大学2017
[2].脱氧胆酸—羧甲基壳聚糖自聚集纳米粒作为阿霉素传递系统的研究[D]. 晋运环.沈阳药科大学2011

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