沙立度胺对人子宫内膜癌细胞增殖及血管内皮生长因子分泌的影响

论文摘要

目的:子宫内膜癌是女性生殖器官常见的恶性肿瘤,其发病率在世界范围内呈持续的上升趋势。尽管通过手术和放、化疗能使早期子宫内膜癌患者的生存率有明显提高,但晚期子宫内膜癌难以治愈的现实迫使人们探索新的治疗手段。随着对肿瘤发病机制研究的不断深入,人们已经认识到:肿瘤的侵袭和转移与新生血管形成密切相关。抗血管新生治疗即针对血管形成的某些因子及其关键步骤进行干预,从而阻断肿瘤内皮细胞血供,使其进入休眠状态并诱导凋亡,有效阻止肿瘤生长和转移,达到治疗肿瘤的目的。目前抗血管生成治疗已成为肿瘤治疗的热点。沙立度胺（Thalidomide,Thd）又名反应停,是一种生物合成血管生成抑制剂,具有抑制血管内皮生长因子（VEGF）活性和诱导细胞凋亡的作用。其已被用于多种实体瘤的Ⅰ、Ⅱ期临床治疗研究,但其对肿瘤血管生成抑制效应及抗瘤效果很不一致,可能存在种属和器官特异性。本实验从基础实验角度探讨其在子宫内膜癌治疗中是否具有可行性,从而为子宫内膜癌的治疗提供一种新的有效的靶向治疗药物。材料和方法:人子宫内膜癌细胞株ishikawa用RPMI-1640培养液（含10%胎牛血清）,在37℃、饱和湿度、5%CO2的条件下培养,细胞贴壁培养,实验所用细胞保持在对数生长。不同浓度的沙立度胺作用于ishikawa细胞,利用MTT法检测细胞的生存抑制率;ELISA法检测VEGF含量;流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞周期。Giemsa染色后,倒置相差显微镜从形态上观察细胞凋亡。所有实验数据用SPSS 13.0版软件包做统计学处理,均以P<0.05为有统计学差异,P<0.01为有显著性差异。结果:1 MTT:不同浓度沙立度胺对子宫内膜癌细胞株作用24小时、48小时、72小时后,细胞增殖受到一定抑制,且呈时间和浓度依赖性。溶解沙立度胺所用的最高浓度的二甲基亚枫（DMSO）对细胞的增殖无影响（P>0.05）。沙立度胺作用24小时后,25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml浓度组的抑制率分别为11.90%、17.14%、28.90%、39.24%、51.00%;作用48小时后,抑制率分别为16.64%、27.1%、39.69%、49.64%、58.18%;作用72小时后,抑制率分别为26.48%、35.92%、45.63%、56.76%、62.82%。2沙立度胺对ishikawa细胞系VEGF分泌量的影响:根据人VEGF-ELISA试剂盒说明配制标准品及绘制标准曲线,得出不同浓度沙立度胺及作用不同时间的ishikawa细胞系VEGF分泌量（pg/ml）结果示:在24h、48h、72h三个时间点中,各个浓度（25μg/ml、50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml、400μg/ml）组间及与对照组间均有显著性差异（P<0.01）,分别为356.7±2.5、299.3±2.4、242.8±1.6、180.3±2.0、135.7±2.2、411.5±3.1;320.4±1.6、271.7±3.1、207.7±2.5、153.4±2.9、107.4±2.1、418.5±2.7;307.5±1.4、250.7±1.0、192.3±2.5、129.1±1.6、92.1±2.0、416.1±2.4。对照组在三个时间点间无统计学差异（P>0.05）,而各个浓度组在三个时间点间均具有显著性差异（P<0.01）。3沙立度胺作用于细胞后的形态学变化:对照组细胞形态饱满,细胞核染色均匀呈圆形或椭圆形,核仁清晰可见;沙立度胺作用48小时后,出现细胞质浓缩,变圆,细胞核浓缩、核碎裂等细胞凋亡特征性形态学改变,但未见大量凋亡小体,随着作用浓度的增加活细胞越少,并且上述现象越明显。4沙立度胺对细胞凋亡率和细胞周期的影响:不同浓度（50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml）组作用48小时后,Ishikawa细胞的凋亡率分别为（7.96±0.29）%、（12.14±0.77）%、（19.06±0.39）%,而空白对照组的凋亡率为（2.59±0.47）%,四组间相比较均有显著性差异（P<0.01）;G0-G1期细胞百分率分别为（44.75±1.54）%、（46.45±0.81）%、（52.45±1.84）%、（40.38±1.54）%,不同浓度沙立度胺组与空白对照组间均有显著性差异（P<0.01）,而50μg/ml组与100μg/ml组间无差别（P>0.05）; S期的分别为（41.40±1.34）%、（26.55±1.21）%、（19.75±1.05）%、（51.80±1.81）%,四组间相比较均有显著性差别（P<0.01）; G2-M期分别为（13.85±0.68）%、（27.00±1.53）%、（27.85±1.99）%、（7.81±0.52）%,不同浓度沙立度胺组与空白对照组间均有显著性差异（P<0.01）,而100μg/ml组与200μg/ml组间无差别（P>0.05）;细胞增殖指数分别为:（55.25±0.71）%、（53.55±0.81）%、（47.55±1.84）%、（59.61±1.55）%,不同浓度沙立度胺组与空白对照组间均有显著性差异（P<0.01）,而50μg/ml组与100μg/ml组间无差别（P>0.05）。结论:1人子宫内膜癌细胞株ishikawa在体外能够分泌VEGF,并且沙立度胺对ishikawa细胞增殖和分泌VEGF的水平均有明显的抑制作用,呈时间浓度依赖性。这将为沙度胺的体内实验及临床运用提供理论依据。2沙立度胺可以通过诱导人子宫内膜癌ishikawa细胞凋亡和G1期生长阻滞而发挥直接的抗肿瘤效应。3沙立度胺能够明显降低S期%,并且呈浓度依赖性。这又为子宫内膜癌的临床治疗提供一个实验依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 沙立度胺对人子宫内膜癌细胞增殖及血管内皮生长因子分泌的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述 血管新生与子宫内膜癌
• 致谢
• 个人简历