小鼠脊髓损伤模型的建立及NB-3对脊髓神经再生及功能恢复作用的初步评估

论文摘要

脊髓损伤（spinal cord injury, SCI）后的修复一直是神经科学领域的一大难题,主要原因是由于脊髓损伤后神经轴突的再生能力非常有限,很难突破损伤处的疤痕组织并与先前的靶细胞建立突触联系,因而限制了对靶细胞神经支配的恢复,进而限制了靶器官功能的恢复。先前的研究表明,通过调控基因表达、去除抑制因子、注射神经营养因子等方法能够在一定程度上促进神经轴突的再生,但效果有限。近年来,脊髓损伤后影响神经再生的抑制因子已成为研究热点,除了传统的胶质瘢痕和髓磷脂相关抑制因子外,神经轴突导向分子、神经粘附分子、肿瘤抑制因子等对神经轴突再生的抑制作用及其机制都已被阐明,因而消除这些抑制因子的抑制作用将有利于脊髓的再生及神经功能的恢复。在本研究中,通过建立小鼠脊髓损伤模型,并采用黄色荧光蛋白（YFP-H）小鼠及DiI染料示踪技术标记皮质脊髓束,从而从形态学上观察成年NB-3基因缺陷小鼠脊髓半切损伤后皮质脊髓束轴突（CST）的再生情况,并使用BBB、BMS评分方法对其运动功能的恢复情况进行评价。研究结果表明,脊髓损伤后成年NB-3基因缺陷小鼠的CST具有一定的再生潜能,并能够促进运动功能的恢复,推测神经轴突认知分子NB-3通过某种机制直接或间接抑制中枢神经系统轴突的再生,从而为今后脊髓损伤再生方面的研究提供线索。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩略词表
• 1 引言
• 1.1 皮质脊髓束简介
• 1.2 皮质脊髓束的发育及其投射特点
• 1.3 脊髓损伤后的神经再生
• 1.4 神经认知分子NB-3的表达特点及其功能
• 2 材料和方法
• 2.1 常规溶液配制
• 2.2 实验动物
• 2.3 脊髓损伤后行为学评分方法
• 2.3.1 Basso Mouse Scale（BMS）
• 2.3.2 The Basso,Beattie,Bresnahan Locomotor Rating Scale（BBB）
• 2.4 小鼠基因型鉴定
• 2.5 小鼠脊髓半切模型制备方法
• 2.6 DiI顺行示踪小鼠皮质脊髓束方法
• 2.7 免疫组织化学切片的制备
• 2.7.1 取材
• 2.7.2 冰冻切片
• 2.7.3 免疫组织化学染色
• 2.7.4 图像采集与处理
• 3 结果
• 3.1 小鼠脊髓损伤模型的建立与评价
• 3.1.1 模型制备
• 3.1.2 运动功能评分
• 3.2 YFP-H转基因小鼠脊髓损伤模型的建立
• 3.3 NB-3缺失对脊髓损伤小鼠运动功能恢复的初步评估
• 3.4 小结与讨论
• 4 总结与讨论
• 4.1 主要结论
• 4.2 研究展望
• 参考文献
• 致谢