人外周血单核细胞迁移分化为角膜上皮样细胞初步研究

论文摘要

目的：通过对单核迁移细胞行体外迁移,探索外周血单核细胞在新鲜角膜缘干细胞和角膜上皮细胞微环境中诱导下,向角膜上皮细胞跨胚层分化的可能性。方法：1、体外模拟白细胞迁移过程的模型：细胞培养插入皿上室（8μm孔径）铺上Ⅳ型胶原蛋白后插入六空板内,种上血管内皮细胞。加上单核细胞悬液于上室,此时下室加入含650ng/ml MCP-1的培养基。48小时后,移去细胞培养插入皿,收集下室细胞。为了观察对此模型的影响因素,将实验分为二组：第一组：上室加入含体积分数10%FBS的基础培养基：第二组：上室不加入含FBS的基础培养基。向两组下室分别添加浓度为650ng/mlMCP-1和Ong/ml MCP-1,48小时后,移去插入皿,收集下室细胞。倒置相差显微镜观察迁移后细胞形态,流式细胞术分别检测迁移前后单核细胞表面相对特异性标志：CD14。2、将收集的迁移细胞置于新鲜角膜缘干细胞和角膜上皮细胞微环境中共培养7d,收集细胞,流式细胞术检测诱导前后细胞表面标志物细胞角蛋白（cytokeratin）、波形蛋白（vimentin）的阳性率。结果：1、流式细胞仪检测,迁移模型模拟前测得上室CD14单核细胞阳性率为19.40%,迁移模型模拟后测得上室CD14单核细胞阳性率为1.44%。2、流式细胞术检测,微环境诱导前迁移细胞Cytokeratin阳性率为1.64%、Vimentin阳性率为96.29%,微环境诱导后迁移细胞Cytokeratin阳性率为11.30%, Vimentin阳性率为31.55%。结论：1、体外模拟白细胞迁移过程后,观察到人外周血单核细胞在不加入FBS、Ⅳcollagen浓度为lug、MCP-1浓度为650ng/ml实验条件时贴壁细胞较多。2、通过微环境诱导前后迁移单核细胞CK、Vimentin阳性率的改变初步认为人外周血单核细胞可能具备跨胚层分化的潜能。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 绪论
• 1.角膜疾病
• 2.组织工程角膜
• 3.干细胞概念
• 4.单核细胞概述
• 5.本实验目的与意义
• 第一部分 人外周血单核细胞体外培养与鉴定
• 引言
• 材料和方法
• 1 材料
• 2.方法
• 3 细胞观察和鉴定
• 结果
• 讨论
• 第二部分 体外模拟白细胞迁移模型
• 前言
• 材料与方法
• 1.主要实验材料
• 2.主要方法
• 结果
• 讨论
• 第三部分 迁移细胞体外诱导分化为角膜上皮样细胞初步研究
• 前言
• 材料和方法
• 1 材料
• 2 主要方法
• 3 细胞观察和鉴定
• 结果
• 3.1 倒置相差显微镜观察细胞生长情况
• 3.2 实验组诱导前后流式细胞术KC检测
• 3.3 实验组诱导前后流式细胞术Vim检测
• 3.4 对照组前后流式细胞术CK检测
• 3.5 对照组前后流式细胞术Vim检测
• 3.6 统计学分析
• 讨论
• 全文结论
• 问题与展望
• 参考文献
• 英文索引
• 在读期间发表的论文
• 致谢