雌激素对ER阳性人乳腺癌细胞趋化因子CXCL12、CXCL8、CX3CL1的调节

论文摘要

目的:了解外源性雌激素对雌激素受体（ER）阳性人乳腺癌细胞趋化因子CXCL12、CXCL8、CX3CL1等表达谱的影响,探索该调控可能的机制。方法:采用Oligo GEArray趋化因子与受体基因表达芯片筛选ER阳性人乳腺癌细胞受雌激素影响而明显改变的趋化因子。RT-PCR验证雌激素对人乳腺癌细胞MCF-7（ER+）、T47D（ER+）、MDA-MB-231（ER-）相关趋化因子（CXCL12、CXCL8、CXCL1、CCL2）表达的影响。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和酶联免疫吸附分析法（ELISA）检测不同剂量雌激素孵育人乳腺癌细胞MCF-7（ER+）不同时间对趋化因子CXCL12、CXCL8、CX3CL1的影响。分析雌激素联合雌激素受体纯拮抗剂氟维司群（ICI182,780）对人乳腺癌细胞MCF-7趋化因子CXCL12、CXCL8、CX3CL1 mRNA表达和细胞外分泌蛋白水平的影响。CCK-8法检测雌激素对MCF-7增殖的作用,流式细胞术分析雌二醇对MCF-7细胞周期的影响。结果:雌二醇可刺激ER阳性人乳腺癌细胞（MCF-7）增殖,并增加MCF-7细胞S期分布;而雌激素受体纯拮抗剂氟维司群联合雌二醇孵育MCF-7,可使细胞G2-M期减少而S期增加,且细胞凋亡增多。同时,雌二醇能够上调MCF-7趋化因子CXCL12、CXCL8、CXCL1、CCL2 mRNA的表达,其中以对CXCL12的影响最为显著（与对照组比较,差异可达4.4倍）;同时下调CX3CL1 mRNA的表达（与对照组比较,差异可达3.5倍）。RT-PCR结果与Oligo GEArray趋化因子与受体基因表达芯片结果相一致。而雌二醇对ER阴性人乳腺癌细胞（MDA-MB-231）上述趋化因子mRNA的表达无明显影响。进一步的研究显示,10nmol/L的雌二醇对MCF-7趋化因子CXCL12、CXCL8、CX3CL1 mRNA表达的影响较为显著。该调节作用在雌二醇孵育的最初1小时即开始显现,并持续到24小时。分析MCF-7细胞培养上清中趋化因子分泌蛋白,可见雌二醇可提高CXCL12、CXCL8分泌蛋白水平,这与其mRNA表达的变化一致。雌激素也可上调CX3CL1胞外蛋白水平,尽管其mRNA表达为下调。当雌二醇联合雌激素受体纯拮抗剂氟维司群孵育ER阳性人乳腺癌细胞MCF-7时,雌激素对相关趋化因子的影响被削弱。如CXCL12 mRNA表达和胞外分泌蛋白水平在雌激素+氟维司群组均显著低于雌激素组。结论:本研究证实雌二醇可改变ER阳性人乳腺癌细胞MCF-7多种趋化因子的mRNA表达和分泌蛋白水平。同时雌激素受体纯拮抗剂氟维司群可在很大程度上逆转此作用。提示,CXCL12、CXCL8、CX3CL1均可能充当雌激素促进乳腺癌细胞生长的靶点;同时可见,雌激素对乳腺癌趋化因子表达谱的影响是多靶点、多环节,其机理至少部分地与雌激素信号转导通路有关。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 雌激素对ER阳性人乳腺癌细胞趋化因子的调节
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结语
• 参考文献
• 附录
• 综述
• 发表和拟发表的文章
• 致谢