异源表达两种抗逆相关基因改良光叶楮抗逆性的研究

论文摘要

光叶楮,为优良的造纸专用树种和极好的环保树种,同时,又因为该树种富含纤维,极有可能成为富有开发潜能的能源植物。鉴于光叶楮本身的诸多优点,其已成为当前极具开发潜能的植物。当前我国造纸工业原料短缺,环境破坏严重,能源紧缺,急需我们开发和利用新型生物资源来满足我国当前需求,因此如何通过基因工程技术改良光叶楮抗逆品质以适应在我国大规模的种植已经成为许多研究者关注的问题。本实验利用农杆菌介导的方法对光叶楮进行两种抗逆相关基因otsA和AtNHX5的遗传转化,通过筛选、组织再生和PCR检测,获得5个株系的转otsA的转基因光叶楮移栽苗和8个株系的转AtNHX5的转基因光叶楮移栽苗。又通过对转基因型光叶楮在低温、高盐和干旱胁迫下的抗性分析,获得了具有强抗旱能力的转otsA光叶楮株系otsA3、otsA13和otsA18和具有强抗盐能力的转AtNHX5光叶楮株系AtNHX5-5、AtNHX5-6和AtNHX5- 15。最后通过RT-PCR的方法对有强抗逆能力的转基因株系其外源基因的表达进行分析,结果显示:在转基因光叶楮内otsA基因的表达量与其抗逆能力可能存在正相关的关系而AtNHX5基因的表达可能存在转录后修饰。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 综述
• 1 植物抗逆基因工程研究进展
• 1.1 植物抗逆性机理的研究进展
• 1.2 基因工程技术在改良植物抗逆性中的应用
• 2 光叶楮生物技术研究状况及进展
• 3. 本论文的研究目的和意义
• 第二章 OTSA 和 ATNHX5 转化光叶楮
• 1 材料与方法
• 1.1 载体
• 1.2 光叶楮基因转化方法
• 1.3 转基因植株的PCR 检测
• 2 结果及讨论
• 2.1 转化结果
• 2.2 转化频率分析
• 2.3 转otsA 基因光叶楮的 GUS 染色
• 2.4 转otsA 基因光叶楮潮霉素的 PCR 检测结
• 2.5 otsA 的 PCR 检测结果
• 2.6 转 AtNHX5 基因光叶楮潮霉素基因的 PCR 检测
• 2.7 AtNHX5 基因的 PCR 检测结果
• 第三章 光叶楮对非生物胁迫的响应
• 1 野生型光叶楮对低温胁迫的响应
• 1.1 材料和方法
• 1.2 结果及讨论
• 2 野生型光叶楮对高盐胁迫的响应
• 2.1 光叶楮叶片在下高盐胁迫的表型变化
• 2.2 光叶楮组培苗在高盐胁迫下的表型变化
• 3 野生型光叶楮对干旱胁迫的响应
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果及讨论
• 第四章 光叶楮转化植株对非生物胁迫的响应
• 1 转OTSA 基因光叶楮对高盐胁迫和干旱胁迫胁迫的响应
• 1.1 转otsA 基因光叶楮与野生型光叶楮对高盐胁迫的响应
• 1.2 转otsA 基因光叶楮与野生型光叶楮对干旱胁迫的响应
• 2 转ATNHX5 基因光叶楮对高盐胁迫和干旱胁迫的响应
• 2.1 转 AtNHX5 基因光叶楮对高盐胁迫的响应
• 2.2 转AtNHX5 基因光叶楮对干旱胁迫的响应
• 第五章 外源基因在光叶楮转化植株中的表达分析
• 1 光叶楮ACTIN 基因片段的克隆
• 1.1 材料和方法
• 1.2 结果与分析
• 1.3 讨论
• 2 OTSA 基因在光叶楮转化植株中的表达分析
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果及讨论
• 3 ATNHX5 基因在光叶楮转化植株中的表达分析
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果及讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 硕士研究生期间发表论文
• 附录