论文摘要
目的:建立老年健忘大鼠模型。分别按照补脾、补肾和固本（补脾肾）3种治疗原则,选择药物作用于模型动物,观察给药后动物记忆功能的改变,从功能、细胞、分子水平诠释固本健脑法改善记忆的作用机理。依据实验结果,阐释“固本-健脑”理论的科学内涵,明确老年健忘与中医脾肾的关系,探讨老年健忘的中医病因病机,为寻求中医改善记忆的方药提供依据,为中医药防治脑机能退化做初步探索,丰富和补充中医脾肾理论的内容。方法:采用文献研究的方法,对古代医家关于健忘的理论探讨进行系统回顾,从文献中找出先贤对健忘的认识,深入探讨记忆的生理基础和健忘的病理机制,按照中医理论,进一步总结出健忘的病因病机。结合导师组治疗老年健忘的经验,依据从古今文献中总结出的健忘的病因病机理论,筛选药物组成补脾健脑方（党参、茯苓、山楂、石菖蒲等）、补肾健脑方（杞果、何首乌、山楂、石菖蒲等）和固本健脑方（党参、杞果、何首乌、茯苓、山楂、石菖蒲等）,以动物实验的方式验证该病因病机理论的科学性。课题组前期的研究结果已证实固本健脑方可以改善记忆,但对其产生疗效的分子机制和补脾与补肾的疗效差异,没有做深入研究。为明确脾肾影响记忆的具体环节,又将该方拆方为补脾健脑方和补肾健脑方,与固本健脑方一起分别作用于模型动物,观察其产生疗效的机制。从功能、细胞、分子等不同层次揭示3种疗法产生疗效的具体机制。用跳台法筛选记忆能力相当的动物,随机分为正常组和模型组。正常组15只,模型组60只。正常组每天腹腔注射生理盐水2ml,模型组腹腔注射D-半乳糖和NaNO2,连续40天,以复制老年健忘动物模型。造模结束后,以跳台法和morrise水迷宫法检测造模结果。将造模成功后的模型组动物,按照完全随机法再分为补脾组、补肾组、固本组和模型组,每组15只。与正常组一起,使实验动物总数达到5组,75只。正常组和模型组动物每天灌胃生理盐水2ml,其余3个治疗组分别以补脾健脑方、补肾健脑方和固本健脑方水煎液灌胃。按照人与动物体表面积折算法,算得大鼠等效剂量分别为每公斤体重50g（固本健脑方）生药、40g生药(补脾侥苑健⒉股鼋∧苑?。浓缩各方药液使每毫升药液含生药2g,每次灌胃2ml,连续20天。灌胃结束后,进行行为学检测。检测结束后,各组动物禁食12h,1-10号动物断头取血,3000r·min-1离心10min,取血清按试剂盒说明书中方法,测定SOD的活力和MDA的含量。取大脑皮层检测Na+-K+-ATP酶活性;取左侧海马检测C-FOS基因表达;取右侧海马检测谷氨酸受体NR2A基因表达。11-15号大鼠,行为学检测结束后,取鼠脑固定后,常规方法进行免疫组化染色,检测神经生长因子（NGF）、神经营养因子-3（NT-3）和HSP70表达。结果:造模结束后,模型组动物皮毛干枯、稀疏、脱落,目眵增多,活动量减少,生长发育迟缓,精神萎靡,饮水量、进食量明显少于正常组,表现出明显的衰老状态,符合衰老动物的特征。给药结束后,跳台法检测,正常组潜伏期明显高于模型组（P＜0.01）,补肾组、固本组成绩高于模型组（P＜0.01）。5分钟内错误次数检测,补脾组、补肾组和固本组均低于模型组（P＜0.01或P＜0.05）。固本组动物成绩优于补脾组（P＜0.05）和补肾组（P＜0.01）。Morrise水迷宫法检测,模型组动物找到隐匿平台的时间明显长于正常组（P＜0.01）。3个治疗组的动物找到平台的时间均低于模型组,其中固本组疗效最好,基本接近正常组（P＞0.05）。平台撤除后,正常组和各给药组动物穿越平台的次数均明显高于模型组（P＜0.01或P＜0.05）。固本组疗效明显优于补脾组（P＜0.01）和补肾组（P＜0.05）,与正常组比较P＞0.05。与正常组比较,模型组动物在平台所在象限（C区）的游泳时间明显减少（P＜0.01）。各给药组动物C区游泳时间均高于模型组（P＜0.01或P＜0.05）,固本组疗效优于补脾组和补肾组（P＜0.01）。模型组动物血清SOD活性明显低于正常组（P＜0.01）,固本组明显高于模型组（P＜0.05）。模型组动物血清MDA含量明显高于正常组（P＜0.01）,各给药组MDA含量有不同程度降低,但3组之间的差异无意义。模型组动物大脑皮层Na*-K+ATP酶活性比正常组极显著降低（P＜0.01）;补脾组和固本组活性均高于模型组（P＜0.01或P＜0.05）。正常组、补脾组、固本组NGF阳性表达均明显高于模型组（P＜0.01或P＜0.05）,补肾组NGF表达明显低于固本组（P＜0.05）。正常组NT-3免疫阳性表达的细胞数和阳性细胞灰度值均明显高于模型组（P＜0.05）,与NGF检测结果一致。正常组大鼠脑内未见HSP70免疫反应阳性细胞。各治疗组动物海马脑区HSP70免疫阳性细胞数均高于模型组（P＜0.01）,以固本组疗效最佳,其HSP70免疫阳性细胞数明显高于补脾和补肾组（P＜0.01）。正常组c-fosmRNA表达低于模型组（P＜0.01）,3个治疗组均高于模型组（P＜0.01）,固本组明显高于补肾组（P＜0.05）,但和补脾组比较差异无意义（P＞0.05）。正常组动物海马有一定量的NR2AmRNA表达,明显高于模型组（P＜0.05）,补肾组和固本组NR2AmRNA表达较模型组明显增高（P＜0.01）,其中固本组疗效最好,明显高于正常组（P＜0.01）。结论:综合以上研究结果课题组认为,老年健忘是一个病变涉及多个脏腑,又与气血痰浊密切相关的综合性复杂病症,但其中心环节是脾肾二脏。纠正了脾肾的亏损,就解决了病变的关键。联合使用D-半乳糖与亚硝酸钠腹腔注射,可以较好复制老年健忘动物模型。固本健脑法可以通过提高机体抗氧化能力、提高大脑皮层组织能量供应、加强神经元的递质传导,促进神经元的修复与再生、拮抗不良因素对神经元的损伤等多种途径改善记忆功能。“固本健脑”是治疗老年健忘的重要治法。
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