氟伐他汀通过抑制SGK1通路减少高糖腹透液诱导的人腹膜间皮细胞FN表达的研究

论文摘要

目的：探讨氟伐他汀对高糖腹透液诱导人腹膜间皮细胞（HPMC）纤维连接蛋白（fibronectin，FN）表达的影响及机制研究。方法：体外培养HPMC，同步化24h后分组，其中MTT分组：正常对照组、高糖腹透液（high-glucose peritoneal dialysate, HGPDS）组、HGPDS+氟伐他汀10-8mol/L10-6mol/L、GSK650394（SGK1抑制剂）10-5mol/L组、单纯氟伐他汀10-8mol/L10-6mol/L组、单纯GSK65039410-5mol/L组、DMSO对照组，各组分别刺激3h、6h、12h、24h、36h、48h、72h，噻唑蓝[3-（4，5-二甲基-2-噻唑）-2，5-二苯基溴化四唑，简称MTT]检测各组细胞活力，倒置显微镜观察细胞形态。RT-PCR分组：①HGPDS分别刺激0h、1h、6h、24h；②正常对照组、HGPDS组、HGPDS+氟伐他汀10-8mol/L10-6mol/L、GSK65039410-5mol/L组、单纯氟伐他汀10-6mol/L组、单纯GSK65039410-5mol/L组，各组均刺激1h检测SGK1mRNA变化，刺激6h检测FN的mRNA表达。Western blot分组同RT-PCR，其中HGPDS组分别刺激0h、3h、6h、12h、24h，加氟伐他汀及抑制剂各组均刺激6h，western blot检测SGK1蛋白质表达。ELISA分组同RT-PCR，其中HGPDS组分别刺激0h、6h、12h、24h、48h、72h，加氟伐他汀及抑制剂各组均刺激24h， ELISA法检测上清液FN蛋白表达的变化。结果：1.正常HPMC形态呈铺路石样，细胞间连接紧密，HGPDS培养HPMC48h后，细胞由铺路石样转为长梭形，细胞间隙增大，氟伐他汀10-6mol/L、GSK65039410-5mol/L可以部分逆转HGPDS诱导的细胞形态的变化。2.与正常对照组比较，DMSO、单纯氟伐他汀及单纯GSK650394对细胞活力无明显影响（P>0.05），含HGPDS各组细胞活力自6h开始即有明显下降（P<0.05），加氟伐他汀及GSK65039410-5mol/L后，细胞活力在24h及36h有明显恢复，与HGPDS比较，HGPDS+氟伐他汀10-6mol/L组、HGPDS+GSK65039410-5mol/L组作用24h细胞活力改善有统计学意义（P<0.05）。3.与HGPDS刺激0h组比较，随着HGPDS刺激时间的延长，SGK1、FN的mRNA表达逐渐增多，达高峰后又逐渐下降。其中，SGK1的mRNA于1h达高峰，FN于6h达高峰（P<0.05或P<0.01）。与HGPDS组比较，氟伐他汀10-7mol/L、10-6mol/L、GSK65039410-5mol/L均可以明显降低HGPDS诱导的SGK1、FN的高表达，差异有统计学意义（P<0.01），氟伐他汀10-8mol/L作用不明显（P>0.05）。与对照组比较，单纯氟伐他汀10-6mol/L、单纯GSK65039410-5mol/L对SGK1、FN mRNA表达无明显影响（P>0.05）。4.与HGPDS刺激0h组比较，随着HGPDS刺激时间的延长，SGK1、FN的蛋白表达逐渐增多，其中，SGK1于6h达高峰，FN于24h达高峰，后逐渐下降（P<0.05或P<0.01）。与HGPDS组比较，氟伐他汀10-7mol/L、10-6mol/L、GSK65039410-5mol/L均可以明显降低HGPDS诱导的SGK1、FN的高表达，差异有统计学意义（P<0.01），氟伐他汀10-8mol/L作用不明显（P>0.05）。与对照组比较，单纯氟伐他汀10-6mol/L、单纯GSK65039410-5mol/L对SGK1、FN蛋白表达无明显影响（P>0.05）。结论：正常情况下人腹膜间皮细胞产生一定量的SGK1、FN，高糖腹透液可促进人腹膜间皮细胞SGK1、FN表达明显增加，且SGK1变化提前于FN的变化。氟伐他汀可明显减少高糖腹透液诱导的SGK1、FN表达，提示氟伐他汀可以通过抑制SGK1信号通路的作用进而减少人腹膜间皮细胞FN的表达，为临床防治腹膜纤维化提供理论依据。

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