营养水平对初产母猪妊娠早期孕酮分泌、胚胎存活及胚胎RBP4、FGFR2、OCT4和PGR基因表达的影响

营养水平对初产母猪妊娠早期孕酮分泌、胚胎存活及胚胎RBP4、FGFR2、OCT4和PGR基因表达的影响

论文摘要

本试验研究不同营养水平对初产母猪妊娠早期胚胎存活、孕酮浓度及胚胎视黄醇结合蛋白4(retinol binding protein4,RBP4)、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor receptor,FGFR2)、POU-域转录因子OCT-4(POU-domain transcription factor Pou5f1,OCT4)、孕酮受体(progesterone receptor,PGR)基因表达的影响。选取日龄和体重(113.40±9.5kg)相近的长白×大白(LY)杂交初产母猪63头,随机分到高、中、低三个营养水平组。高、中、低水平组母猪分别按2.0倍、1.2倍、0.6倍维持需要量饲喂。分别在母猪妊娠12天、25天和35天称重,屠宰和取样。试验结果如下:1、营养水平对活胚存活率有显著影响。中水平组母猪妊娠12天、25天和35天活胚存活率以中水平组最高(P<0.05),高水平组和低水平组差异不显著(P>0.05)。2、营养水平影响母猪不同妊娠时期血液和子宫液孕酮浓度。高水平组母猪在妊娠12天、25天、35天的血液孕酮浓度极显著低于中水平组和低水平组(P<0.01),中水平组和低水平组之间没有显著差异(P>0.05),将血液孕酮浓度与胚胎存活率做相关分析表明,母猪妊娠12天时,血液孕酮浓度与胚胎存活率成显著正相关(P<0.05);相关分析表明:母猪妊娠12天、25天、35天时,血液孕酮浓度与采食量成极显著负相关(P<0.01)。母猪妊娠12天时,高水平组子宫分泌液孕酮浓度极显著低于低水平组(P<0.01),显著低于中水平组(P<0.05),而中水平组与低水平组间没有显著差异(P>0.05),进一步分析表明母猪妊娠12天时,子宫液孕酮与采食量呈显著负相关(P<0.01),母猪妊娠25天时,各水平组之间子宫液孕酮浓度差异不显著(P>0.05)。3、胚胎RBP4基因表达受营养水平的影响,RBP4的表达量与胚胎存活率呈显著正相关(P<0.05)。在母猪妊娠12天时,中水平组胚胎RBP4基因表达量极显著高于高水平组和低水平组(P<0.01),低水平组显著高于高水平组(P<0.05);母猪妊娠25天时,中水平组胚胎RBP4基因表达量极显著高于高水平组(P<0001),显著高于低水平组(P<0.05),低水平组与高水组差异不显著(P>0.05);母猪妊娠35天时,中水平组胚胎RBP4基因表达量显著高于高水平组(P<0.05),与低水平组差异不显著(P>0.05),低水平组胚胎RBP4基因表达量与高水平组的差异不显著(P>0.05)。4、营养水平显著影响胚胎FGFR2基因表达量。母猪妊娠12天、25天和35天时,中水平组的胚胎FGFR2基因表达量极显著高于高水平组和低水平组(P<0.01),而低水平组与高水平组间差异不显著(P>0.05)。5、营养水平显著影响母猪妊娠12天胚胎0CT4基因的表达。母猪妊娠12天时,高水平组胚胎0CT4基因表达量极显著低于中水平组和低水平组(P<0.01),中水平组极显著低于低水平组(P<0.01):妊娠25天、35天时,各水平组之间差异不显著(P>0.05)。胚胎0CT4的表达量随着妊娠天数的增加呈下降趋势。6、母猪不同妊娠时期,营养水平对胚胎孕酮受体表达量有不同的影响。在母猪妊娠12天时,营养水平对胚胎孕酮受体表达量没有影响(P>0.05);在妊娠25天时,低水平组胚胎孕酮受体表达量极显著高于高水平组(P<0.01),显著高于中水平组(P<0.05),高水平组与中水平组之间没有显著差异(P>0.05);母猪妊娠35天时,中水平组胚胎孕酮受体表达量极显著高于高水平组(P<0.01)和低水平组(P<0.01),高水平组显著低于低水平组(P<0.05)。由以上结果可以得出以下结论:(1)营养水平显著影响母猪血液和子宫液中孕酮浓度的变化,高营养水平增加血液孕酮清除率,导致血液和子宫液孕酮浓度降低,低孕酮浓度不利于胚胎存活。低营养水平孕酮浓度高,但营养水平低,下调胚胎RBP4和FGFR2的表达,不利于胚胎存活。(2)营养水平显著影响早期胚胎视黄醇结合蛋白和FGFR2的表达,胚胎视黄醇结合蛋白的表达量与胚胎存活率呈显著正相关,中营养水平显著上调胚胎视黄醇结合蛋白和FGFR2基因的表达,从而有利于胚胎存活。(3)营养水平对早期胚胎0CT4和PGR表达量在不同的妊娠时间有不同的影响,表明营养水平的变化可能影响胚胎中这些基因的表达量,从而影响胚胎存活。

论文目录

  • 摘要
  • Abstract
  • 前言
  • 1 文献综述
  • 1.1 配种后营养水平对胚胎存活率的影响
  • 1.1.1 配种后高营养水平对胚胎存活率的影响
  • 1.1.2 低营养水平对胚胎存活率的影响
  • 1.2 不同营养水平对孕酮浓度的影响
  • 1.2.1 孕酮在繁殖上的作用
  • 1.2.2 不同营养水平对血液孕酮的影响
  • 1.2.3 不同营养水平对子宫液中孕酮酮浓度的影响
  • 1.3 不同营养水平对胚胎基因表达的影响
  • 1.3.1 视黄醇结合蛋白(RBP)
  • 1.3.2 孕酮受体
  • 1.3.3 OCT4
  • 1.3.4 成纤维细胞生长因子受体(FGFR)
  • 1.4 MRNA定量的方法研究
  • 1.4.1 荧光定量反转录多聚酶链式反应(Real Time RT-PCR)
  • 1.4.2 Real Time PCR定量的计算
  • 2 存在的问题以及研究的目的和意义
  • 3 材料与方法
  • 3.1 试验设计
  • 3.2 试验动物选择及分组
  • 3.3 试验饲粮及组成
  • 3.4 饲养管理
  • 3.5 观测指标及测定方法
  • 3.5.1 血样收集及孕酮浓度测定
  • 3.5.2 屠宰取样
  • 3.6 实验室分析用仪器和试剂
  • 3.6.1 主要仪器设备
  • 3.6.2 主要试剂
  • 3.6.3 试剂的配置方法
  • 3.7 RT-PCR测定步骤
  • 3.7.1 总RNA的提取
  • 3.7.2 cDNA第一链的合成(RT)
  • 3.7.3 引物的设计与合成
  • 3.7.4 标准品的制备
  • 3.7.5 RT产物Real Time PCR反应
  • 3.7.6 RT-PCR扩增产物的电泳
  • 3.8 数据处理和统计分析
  • 4 结果与分析
  • 4.1 营养水平对早期总活胚数和胚胎存活率的影响
  • 4.2 不同营养水平对血液、子宫液孕酮浓度的影响
  • 4.3 胚胎总RNA提取的电泳结果
  • 4.4 反转录产物PCR
  • 4.5 管家基因的Real Time PCR
  • 4.6 不同营养水平对胚胎视黄醇结合蛋白(RBP4)表达量的影响
  • 4.7 不同营养水平对胚胎成纤维细胞生长因子受体2(FGFR2)表达量的影响
  • 4.8 不同营养水平对胚胎OCT4基因表达量的影响
  • 4.9 不同营养是水平对孕酮基因受体表达量的影响
  • 4.10 相关性分析
  • 5 讨论
  • 5.1 营养水平对胚胎存活率的影响
  • 5.2 营养水平对孕酮浓度的影响
  • 5.3 营养水平和孕酮浓度以及胚胎存活的关系
  • 5.4 不同营养水平对胚胎RBP4、FGFR2、OCT4、PGR基因表达量的影响
  • 5.4.1 不同营养水平对视黄醇结合蛋白基因表达的影响
  • 5.4.2 不同营养水平对FGFR2基因表达的影响
  • 5.4.3 不同营养水平对OCT4基因表达的影响
  • 5.4.4 不同营养水平对PGR基因表达量的影响
  • 6 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录Ⅰ 孕酮浓度的EIA检测方法
  • 附录Ⅱ RNA的提取、检测和DNASEI处理
  • 附录Ⅲ RNA的反转录和常规PCR
  • 附录Ⅳ 实时定量PCR(RT-PCR)
  • 攻读学位期间发表的学术论文
  • 相关论文文献

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