李剑颖（福建安溪县铭选医院362400）
【中图分类号】R361【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2011)9-0007-01
【摘要】目的总结网状纤维染色在病理工作应用中的体会。方法取活体组织检查标本进行网状纤维染色。结果注意Gomori氏银氨液的配制质量、染色时间、氯化金调色时间的控制等等可使网状纤维染色达到理想效果。结论注意网状纤维染色过程的各个操作环节、可使染色达到满意效果，在病理诊断中具有积极的意义。
【关键词】网状纤维染色应用
网状纤维是网状结缔组织内的一种纤维，由网状细胞产生，纤维细而有分支，穿行于网状细胞体和突之间，交错排列成致密的网状，故称之。此种纤维用H.E染色一般不易分辨，若用银氨溶液浸染能使纤维变成黑色，故又称嗜银纤维。网状纤维多分布在结缔组织与其他组织交界处，如基膜的网板、肾小管周围、毛细血管周围等等。在造血器官和内分泌腺，有较多的网状纤维构成它们的支架，所以网状纤维染色应用非常广泛。常用于显示和鉴别肿瘤的性质和来源，如癌和肉瘤、血管内皮瘤和血管外皮瘤等，也可用于观察和研究癌组织的发生、发展及恶性程度；显示与观察基底膜的变化，从而有效地判断其上皮来源，且有助于区分不同来源的上皮肿瘤；还可用于识别坏死组织的结构及类型等等。因此，作为常规染色的必要补充，网状纤维染色在病理诊断中起到重要的辅助作用，是病理染色技术不可缺少的组成部分。网状纤维染色方法较多，其中最常用的是Gomori法[1]，笔者就工作中积累的经验和体会总结如下。
1资料和方法
1.1材料选自本院病理科活体组织检查标本，中性福尔马林固定，石蜡包埋。
1.2试剂配制Gomori银氨液：取10%硝酸银4滴盛入小量杯中，加入1滴10%氢氧化钠，即产生灰黑色沉淀；记录总量，加蒸馏水洗涤沉淀物，倾去上清液，再加入蒸馏水，反复3次，最后加蒸馏水，凑足总量，然后逐滴加浓氨水并不断摇晃，使混合均匀；至沉淀刚好溶解，加入10%硝酸银至沉淀再次生成，再滴入1滴至数滴的浓氨水，观察沉淀物将溶尽，尚留数个小颗粒时停止，加蒸馏水3倍后装入棕色玻璃瓶，密封避光保存备用。
1.3方法[2]①常规石蜡切片，脱蜡至水。②入0.25%高锰酸钾5分钟，自来水洗。③2%草酸漂白，自来水洗，蒸馏水洗。④2%硫酸铁铵媒染1分钟，细水速洗。⑤入Gomori银氨液1分钟（加盖进行），蒸馏水洗。⑥20%的甲醛溶液还原1分钟，蒸馏水洗。⑦0.2%氯化金液镜下观察调色1-2分钟，蒸馏水洗。⑧2%硫代硫酸钠固定1分钟，蒸馏水洗，V.G液复染3分钟。⑨无水乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
2结果
网状纤维呈黑色，胶原纤维呈红色，背景呈黄色。
3讨论
网状纤维染色中，高锰酸钾的作用是氧化，使网状纤维具有选择性，染色力增强，同时改善背景色调，减弱银氨液对胞核的着染，有利于胞核的复染。不经氧化的切片，网状纤维不能很好地显示出来，故高锰酸钾存放时间不能过长，以免失去氧化作用。网状纤维是由含有糖蛋白的胶原蛋白组成，易与氨性银结合，即带正电荷的二氨合银离子被具有嗜银性物质的网状纤维吸附，再经甲醛还原成棕黑色金属银，从而使网状纤维显色。因此为了得到满意而稳定的染色结果，银氨液的配制是关键，配制时滴入氨水的量要恰当，过多感应下降会使液体过碱，滴染使切片容易脱落，过少则感应上升，浸染效果不好。由于配好的银氨液很敏感，受光或空气中的氧的作用后均易解离出银盐，故宜用棕色玻璃瓶密封避光保存于4℃冰箱中，不能使用金属器皿，如现用现配则效果更佳。银氨液滴染水洗时间也要恰当，采用倾斜流水速洗，否则会产生银颗粒沉淀，水洗时间过长则影响还原，甲醛是还原剂，能把与网状纤维的银氨化合物还原成棕黑色的金属银，因此20%甲醛液应经常更换。用0.2%氯化金调色须镜下控制，如时间短，会增加背景染色；时间长，则会使网状纤维颜色变浅。网状纤维具有嗜银性，而胶原纤维结构疏松，宽孔粗纤维能与酸性染料结合[3]，在通常情况下为鉴别诊断和研究应用需要，同时再进行胶原纤维对比染色，可使色彩分辨更为鲜明、清晰，从而得到鉴别诊断的满意结果。
在病理诊断及鉴别诊断过程中，HE切片的光镜观察是病理诊断的基础，也是最基本的最主要的手段，但单纯用HE染色有时很难判别其病因、组织来源及发病机制等方面问题，故常需借助其他辅助手段来补充，比如特殊染色、免疫组化染色、电镜及原位杂交等方法。从而使病理诊断的准确性不断得到提高，有时这些方法在鉴别诊断上能起决定性作用，其中特染是专门用于显示某些特定目的物的染色方法，是病理诊断及科学研究领域不可缺少的组成部分。而网状纤维染色在病理工作中是最常用的特殊染色法，由于网状纤维分布极为广泛，多种疾病的病变均会影响网状纤维，所以网状纤维染色的结果对病理诊断起到很大作用。
参考文献
[1]龚志锦，詹镕洲.病理组织制片和染色技术.上海：上海科学技术出版社，1994:70-80.
[2]中华医学会.临床技术操作规范.病理学分册.北京：人民出版社，2004：134-135.
[3]全国卫生专业技术资格考试专家委员会，病理学技术.北京：人民卫生出版社，2009:441.