论文摘要
一、亲环素A在氧化低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞中表达的变化目的通过氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导的平滑肌细胞,随着ox-LDL浓度和时间的变化,观察亲环素AmRNA和蛋白质的表达改变,为进一步分析亲环素A在ox-LDL诱导的平滑肌细胞中的作用奠定基础。方法实验采用不同浓度（0,20,40,80,160 mg/L）ox-LDL与本室建立的酶消化法分离的大鼠主动脉血管平滑肌细胞[1],共同孵育72小时,用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blot）分别检测亲环素A mRNA和蛋白质的表达改变;然后选择80mg/L ox-LDL与细胞共同孵育不同的时间（0,24,48,72,96小时）,同样用RT-PCR和Western blot分别检测亲环素A mRNA和蛋白质的表达改变。结合文献,我们选择80mg/L ox-LDL与细胞共同孵育0,72小时两组,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量。结果不同浓度ox-LDL与血管平滑肌细胞共同孵育,随ox-LDL浓度增加,亲环素A mRNA和蛋白质的表达呈现浓度依赖性减弱;80mg/L ox-LDL与细胞共同孵育不同的时间,随ox-LDL孵育时间延长,亲环素A mRNA和蛋白质的表达呈现时间依赖性减弱;差异有显著性（P< 0.05）。油红O染色和高效液相色谱法检测结果显示,80mg/L ox-LDL与细胞共同孵育72小时,细胞胞浆内大量脂滴存在,细胞内胆固醇酯/总胆固醇比值为57.9% （>50%）,细胞符合泡沫细胞特征。结论Ox-LDL可抑制血管平滑肌细胞中亲环素A的表达并诱导泡沫细胞形成。二、氨氯地平对ox-LDL诱导的血管平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达的影响及其对细胞内胆固醇蓄积的作用目的观察不同浓度（0,0.1,1.0,10.0μM）氨氯地平对ox-LDL诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达的影响及其对胆固醇蓄积的作用,从一个新的角度探讨氨氯地平的抗动脉粥样硬化作用。方法在第一部分实验基础上,我们选择ox-LDL的处理浓度与时间分别为80 mg/L、72小时,建立血管平滑肌细胞泡沫化模型。实验分为6组:对照组、ox-LDL组、（0.1,1.0,10.0μM）氨氯地平预先处理细胞1小时后加入80 mg/L ox-LDL共同孵育72小时组及氨氯地平（10.0μM）单独处理组,油红O染色观察细胞内脂滴的形成情况,高效液相色谱法检测细胞内胆固醇含量;Western-blot和RT-PCR分别检测亲环素A mRNA和蛋白质的表达改变;进而分析氨氯地平对ox-LDL诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A表达的影响及其对胆固醇蓄积的作用。结果用80mg/ L ox-LDL与平滑肌细胞共同孵育72小时,油红O染色显示,ox-LDL组细胞内大量脂滴形成,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值为57.9%,符合泡沫细胞特征;预先予氨氯地平处理后,随着药物浓度的增加,细胞内脂滴逐渐减少,细胞内胆固醇酯/总胆固醇的比值逐渐降低,至10.0μM氨氯地平处理细胞组效果最明显,为37.8%;RT-PCR和Western-blot检测,发现ox-LDL处理组,细胞内亲环素A的表达明显减少;预处理氨氯地平,随着药物浓度的增加,可使细胞内亲环素A的表达逐渐增加,呈现浓度依赖性,尤其10.0μM氨氯地平预处理细胞组效果最明显,较ox-LDL组有显著性差异,P<0.05。结论采用氨氯地平预先处理,可上调ox-LDL诱导的平滑肌细胞泡沫化过程中亲环素A的表达,减轻细胞内的胆固醇蓄积,从而延缓或抑制ox-LDL诱导的平滑肌细胞泡沫化过程。
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标签：氨氯地平论文; 氧化低密度脂蛋白论文; 平滑肌细胞论文; 泡沫细胞论文; 亲环素论文; 胆固醇蓄积论文; 动脉粥样硬化论文;