论文摘要
采用Cell Titer-BlueTM细胞活性检测方法,以中国仓鼠卵巢瘤细胞株（CHO）为模型细胞株,对安徽农业大学虫生菌研究中心保存的40株采自全国各地的昆虫病原真菌（Entomopathogenic fungi）的菌丝体提取物,进行了抗肿瘤活性的系统性筛选。活性菌株的筛选试验结果显示,在供试的40株菌中,菌株RCEF0851、RCEF0508、RCEF0514、RCEF0108菌丝体的乙酸乙酯和二氯甲烷提取物,在100μg/mL的实验浓度下对CHO细胞的抑制率都在70%以上。在对上述细胞毒性较高的4株虫生真菌代谢物进行复筛时,发现菌株RCEF0851的乙酸乙酯和二氯甲烷（EAE）提取物活性最高,当终浓度为80μg/ml时,对CHO肿瘤细胞的抑制率达到97.44±1.43%。其它菌株提取物对CHO肿瘤细胞的抑制率也都在67%以上,这些菌株都有进一步的研究价值。考虑到工作效率的问题,本研究暂先仅研究活性最强的菌株RCEF0851。本试验通过比较不同反相柱的分析效果比较,发现菲罗门的固定相为SynergiHydro的色谱柱对提取物混合组分分离效果最好,所以本研究用该柱进行分离制备,最终获得较大量的三个纯化合物Hh-1、Hh-2和Hh-3。其纯度由高效液相法（HPLC）分析得到了确认。它们在浓度为40μg·ml-1时,对CHO肿瘤细胞的抑制率分别为:83.61%,15.38%,0%。化合物Hh-1为淡黄色粉末。用高分辨质谱、紫外光谱、1H、13C、DEPT135、HMQC、COSY和HMBC对分离出的化合物进行了结构鉴定,结果表明化合物Hh-1为细皱青霉素Rugulosin,分子式为C30H22O10,虽然该化合物是一近年来发现的结构较特别的已知抗菌化合物,但在虫生真菌中尚属首次发现,其对CHO细胞的强烈细胞毒性也是首次被发现。由于活性强,含量较高,有进一步开发抗肿瘤药物的潜力。化合物Hh-2为橘红色粉末,高分辨质谱、紫外光谱、一维和二维核磁共振谱鉴定结果显示该化合物分子式为C30H18O10,是醌茜素,属于二蒽醌类化合物,虽然该化合物是一已知化合物,但是该物质尚属首次在虫生真菌中发现。据报道醌茜素体外能明显阻止多种肿瘤细胞株的生长,但本研究在用CHO细胞进行细胞毒实验时,发现其细胞毒性较低。化合物Hh-3是一种白色粉末,分子式为C28H44O,质谱和核磁共振谱鉴定的结果为麦角甾醇。该化合物没有抗肿瘤活性。从结构上看该化合物与前两个活性化合物无直接的代谢关系。