论文摘要
基于基因芯片技术（Gene chip）和实时荧光定量PCR（Real time fluorescence quantitative PCR, Real time-qPCR）技术,本文从基因水平对冠心病（Coronary heart disease,CHD）、糖尿病肾病（Diabetic nephropathy, DN）和乳腺癌（Breast cancer, BC）的病理机制进行了初步研究。首先,采用基因芯片技术研究高血脂冠心病（Hyperlipidemia-CHD, H-CHD）与非高血脂冠心病（Non hyperlipidemia-CHD, NH-CHD）差异基因,筛选得到564个差异基因,对其进行生物信息学分析。基因本体论（Gene Oncology, GO）和通路注释分析发现,有4个显著富集的GO节点涉及脂代谢相关的生物学过程（10.5%）,5个显著富集的通路涉及脂代谢相关反应,GO节点分析结合通路分析得到了6个重要的目标基因。从基因水平揭示了冠心病与脂代谢的相关性,目标基因可能为H-CHD和NH-CHD预诊断研究提供新思路。其次,利用实时荧光定量PCR （Real time-qPCR）技术检测3个血流动力学易感基因的表达量,探讨糖肾方（TSF）治疗糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy, DN）患者对易感基因表达量的影响。从给药前DNⅢ期和DNIV期患者到给药后3个月和6个月,肾小球滤过率（Glomerular filtration rate, GFR）和尿微量白蛋白（Microalbuminuria, MALB）水平有所改善,3个基因表达量均具有不断接近正常人水平的趋势,给药6个月的基因表达改善效果优于给药3个月。揭示通过TSF长期调理逐步改善DN患者体内代谢紊乱,缓解其血流动力学异常状况,为中药复方TSF的临床疗效提供了评价指标。最后,建立了乳腺癌（Breast cancer, BC）相关基因表达量的Real time-qPCR检测方法,测定了17例正常人和15例BC患者VEGF、Bcl-2、Cox-2基因的表达量。从分子生物学水平阐述了基因表达变化与BC的相关性,为乳腺癌诊断方法提供新的思路。
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摘要Abstract第1章 引言1.1 基因组学和转录组学的研究与进展1.1.1 基因组学简介1.1.2 基因组学研究进展1.1.3 转录组学简介1.1.4 转录组学进展与应用1.2 冠心病、糖尿病肾病和乳腺癌相关基因研究1.2.1 冠心病相关基因研究1.2.2 糖尿病肾病血流动力学相关基因研究1.2.3 乳腺癌相关基因研究1.3 基因芯片技术概述和实时荧光定量PCR技术概述1.3.1 基因芯片实验原理与检测方法1.3.2 实时荧光定量PCR实验原理与检测方法1.3.3 基因芯片与实时荧光定量PCR的应用1.4 本论文的主要内容及创新点1.4.1 研究背景1.4.2 课题研究内容及方法1.4.3 本论文的创新点第2章 血脂差异冠心病基因水平的初步研究2.1 本章引论2.2 实验样本2.3 实验试剂和仪器2.4 芯片实验方法2.4.1 芯片样本制备2.4.2 芯片杂交过程2.4.3 差异基因分析与检测2.5 结果与讨论2.5.1 总RNA质量鉴定2.5.2 差异基因聚类分析2.5.3 差异基因Go term注释分析2.5.4 差异基因KEGG通路注释分析2.5.5 差异基因互作网络分析2.6 本章小结第3章 糖肾方对糖尿肾病血流动力学相关基因表达的影响3.1 本章引论3.2 实验样本3.3 实验试剂和仪器3.4 实验方法3.4.1 引物和探针的设计3.4.2 总RNA提取3.4.3 cDNA的合成3.4.4 纯化产物的生成3.4.5 标准曲线的建立3.4.6 样本定量检测3.4.7 PCR数据处理3.4.8 实验方法的重复性3.5 结果与讨论3.5.1 AGT基因的表达3.5.2 AGTR2基因的表达3.5.3 ADR β 3基因的表达3.5.4 糖肾方防治糖尿病肾病的机理探讨3.6 本章小结第4章 乳腺癌相关基因的初步研究4.1 本章引论4.2 实验部分4.2.1 实验样本4.2.2 实验试剂和仪器4.2.3 实验方法4.3 结果与讨论4.3.1 VEGF基因4.3.2 Cox-2基因4.3.3 Bcl-2基因4.4 本章小结第5章 结论5.1 研究总结5.2 需进一步开展的工作参考文献致谢硕士期间发表的学术论文附录一.GO生物学过程注释附录二.KEGG通路注释
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