伊氏锥虫VSG抗原库的建立及其免疫保护效果检测

论文摘要

锥虫（Trypanosome）能通过不断改变膜表面变异糖蛋白（variable surface glyco- protein,简称 VSG）,逃避宿主免疫反应。VSG 是公认的强免疫原,但只能使机体产生针对同型虫体的免疫保护,而对异型虫体不起保护作用。有研究表明锥虫在感染动物早中期产生的变异体数目是有限的,且这些变异体出现的重复率很高,最高可达 60%,我们称这些变异体为优势变异体。我们设想提纯全部优势变异体 VSG,建立优势 VSG 抗原库,期望该抗原库能抑制虫体变异或抑制虫体的第二次变异,从而对动物起到较好的免疫保护作用,克服因抗原变异引起的免疫失败。 根据锥虫在兔体内可产生不同变异体的特性,将伊氏锥虫云南水牛单克隆株顺序感染五只新西兰大白兔,分离到 50 个单克隆群体,经间接免疫荧光实验证明:后四只兔子出现第一次虫血症高峰的变异体,均包含在第一只兔体内分离得到的 9个优势变异体之内;这 50 个变异体分属于 20 个抗原型,即共分离到 20 个优势变异体。提纯所有优势变异体表面糖蛋白,制备 VSG 抗原库。用不同剂量抗原库免疫小鼠后进行攻虫,结果显示:经四次免疫后,20μg 剂量对随机抽取的两个变异体100 条虫体的保护率分别达到 83%和 67%;改变免疫方法,经三次免疫后的保护效果不理想;用单一 VSG 抗原免疫小鼠,接种来自不同兔体的同型虫体,不能起到相应保护作用。 该抗原库的最佳免疫保护率达到 80%以上,它的建立为伊氏锥虫疫苗的研制开辟了一条新的途径。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 锥虫和锥虫病简介
• 1.2 有关锥虫研究的四个术语
• 1.2.1 Clone
• 1.2.2 Stock
• 1.2.3 Stabilate
• 1.2.4 The First Relapse Population
• 1.3 锥虫的VSG 分离纯化
• 1.4 锥虫的单克隆
• 1.4.1 动物体内克隆
• 1.4.2 体外克隆
• 1.5 锥虫抗原变异体 VAT 的建立和鉴定
• 1.6 锥虫的体外培养
• 1.7 锥虫疫苗研究进展
• 1.7.1 致弱锥虫制苗
• 1.7.2 强毒锥虫制苗
• 1.7.3 抗独特型抗体制苗
• 1.7.4 基因工程疫苗
• 1.7.5 亚细胞成分疫苗
• 1.7.6 锥虫疫苗展望
• 1.8 伊氏锥虫抗原变异规律研究
• 1.9 锥虫感染宿主后引起的免疫反应
• 2 实验一伊氏锥虫 VSG 的提纯和鉴定
• 2.1 材料
• 2.1.1 虫株
• 2.1.2 实验动物
• 2.1.3 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 虫体复苏
• 2.2.2 虫体增殖
• 2.2.3 伊氏锥虫的纯化
• 2.2.4 伊氏锥虫优势变异体 VSG 抗原的提纯
• 2.2.5 兔源抗 VAT 抗血清采集
• 2.2.6 VSG 的SDS-PAGE 纯度和分子量鉴定
• 2.2.7 Wester-blot 半干法鉴定 VSG
• 2.3 结果
• 2.3.1 提纯 VSG 的分子量测定
• 2.3.2 提纯 VSG 的 Western-blot 鉴定
• 2.4 讨论
• 3 实验二 VSG 抗原库免疫保护率检测
• 3.1 材料
• 3.1.1 抗原
• 3.1.2 实验动物
• 3.1.3 主要试剂
• 3.2 方法
• 3.2.1 VSG 抗原库对不同变异体免疫保护效果实验
• 3.2.2 不同抗原注射量的免疫保护效果检测
• 3.3 结果
• 3.3.1 VSG 抗原库对不同变异体免疫保护效果实验结果
• 3.3.2 不同抗原注射量的免疫保护实验结果
• 3.4 讨论
• 3.4.1 VSG 抗原库对不同变异体免疫保护效果讨论
• 3.4.2 初探该抗原库最佳免疫剂量结果讨论
• 4 实验三 VSG 抗原库及单一抗原免疫保护效果检测
• 4.1 材料
• 4.1.1 抗原
• 4.1.2 实验动物
• 4.1.3 主要试剂
• 4.2 方法
• 4.2.1 试验方案
• 4.2.2 血清制备
• 4.2.3 ELISA 检测方法的建立
• 4.3 结果
• 4.3.1 免疫保护率检测
• 4.3.2 ELISA 检测结果
• 4.3.3 三次免疫后血清抗体动态变化趋势
• 4.4 讨论
• 4.4.1 免疫失败的分析总结
• 4.4.2 免疫方法对免疫效果的影响
• 4.4.3 锥虫感染宿主后引起特异性抗体的变化
• 4.4.4 该抗原库建立的意义
• 5 结论
• 6 存在的问题
• 致谢
• 参考文献
• 作者简介