H5N1亚型禽流感病毒荧光抗体的制备及初步应用

论文摘要

禽流感（Avian influenza,AI）是由A型流感病毒引起的一种禽类传染综合征,人类亦能被感染,且死亡率较高。近年来禽类H5N1亚型流感在全球范围内的不断爆发引起了世界的高度关注,所以建立特异、准确、敏感检测禽流感的方法,成为迫在眉睫的问题,也成为目前研究的热点。本研究利用单克隆抗体技术制备禽流感病毒（AIV）血凝素蛋白单克隆抗体,纯化后用异硫氰酸根荧光素（FITC）进行标记,制备荧光抗体,结合直接免疫荧光实验（dFAT）建立检测H5N1亚型AIV的检测方法,并将其与其他AIV毒力检测方法进行比较,同时通过免疫组化的方法运用荧光抗体检测了AIV在感染动物体内的分布情况。将禽流感病毒HAB/01株纯化后免疫8周龄雌性BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用间接ELISA筛选阳性细胞孔,再经有限稀释法克隆培养,筛选稳定分泌单抗的细胞株。本研究共获得3株稳定分泌抗禽流感病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1B6、2A3和3A5。其中1B6为IgM,2A3和3A5为IgG1类型;经过鉴定:其腹水HI效价分别为1:26、1:26、1:28;且与新城疫病毒及其他亚型的禽流感病毒不发生交叉反应;Western-blot分析表明,3A5株单抗为抗禽流感病毒血凝素蛋白单抗。采用G蛋白亲和柱层析对腹水进行纯化,将纯化的禽流感病毒血凝素蛋白单抗用FITC标记制备荧光抗体,并对该荧光抗体进行质量鉴定,试验结果表明,所制备的荧光抗体具有特异性和较强的敏感性,可初步应用于AIV的实验室检测。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 禽流感病毒学研究进展
• 1.3 禽流感病毒实验室诊断技术的研究进展
• 1.4 单克隆抗体技术及免疫荧光技术在禽流感病毒检测方面的优势及应用
• 1.5 论文的研究目的和内容
• 第二章 H5N1禽流感病毒HA蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
• 2.1 材料和方法
• 2.2 结果
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 第三章 H5N1禽流感病毒HA蛋白荧光抗体的制备及鉴定
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 第四章 H5N1禽流感病毒HA蛋白荧光抗体在动物模型建立中的初步应用
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果
• 4.3 讨论
• 4.4 小结
• 结论
• 致谢
• 参考文献