论文摘要
背景:甘露聚糖结合凝集素（mannose-binding lectin, MBL）是一种由肝脏合成,存在于血浆中的C型凝集素。MBL通过结合病原微生物表面的甘露糖等糖基受体而直接介导调理吞噬作用和/或通过MBL相关丝氨酸蛋白酶（ MBL-associated serine protease,MASP）途径激活补体,在机体的天然免疫防御中发挥重要作用。MBL水平主要受基因多态性影响:结构基因第一外显子在第52、54和57密码子的3个点突变破坏了MBL胶原样区结构,导致MBL多肽链不能寡聚化,成为无功能蛋白在血浆中易被降解。启动子区的基因多态性（single nucleotide polymorphisms, SNPs）则从转录水平上影响MBL的浓度,意义较大的是H/L,X/Y,P/Q三个多态性位点,分别位于-550,-221和+4。MBL基因缺陷所致MBL水平异常与感染性疾病、自身免疫性疾病等关系密切。反复呼吸道感染（recurrent respiratory tract infection, RRTI）严重影响儿童的生长发育和智力发育,除营养、环境污染、生活习惯及其他罕见的原发性免疫缺陷病外,MBL缺陷作为最常见的免疫缺陷状态,可能是我国儿童RRTI高发的原因之一。目的:通过检测正常儿童及RRTI儿童MBL血浆水平、结构基因第一外显子和启动子区基因多态性,了解重庆地区儿童MBL基因多态性与RRTI的关系;探讨RRTI体液免疫功能状态并分析两者对RRTI的共同影响,进一步认识RRTI的免疫学发病机理。方法:应用酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）、序列特异性引物-聚合酶链反应（sequence specific primers polymerase chain reaction,PCR-SSP）及聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（restriction fragment length polymorphism polymerase chain reaction, PCR-RFLP）方法检测120例重庆地区汉族普通儿童及70例RRTI儿童MBL血浆水平、结构基因第一外显子52、54、57密码子和启动子区-550、-221及+4位点基因多态性。免疫散射比浊法检测RRTI儿童IgG、IgA、IgM、C3、C4及IgG亚类水平。MBL水平两组间比较用Wilcoxon非参数检验方法,多组间比较用Kruskal-Wallis非参数检验方法;免疫球蛋白（immunoglobin,Ig）及补体水平比较采用t检验;各组间等位基因频率,基因型频率及构成比差异用χ2检验或Fisher精确概率检验,检验水准设为α= 0.05。结果:1、RRTI儿童MBL血浆水平范围在05199ng/ml,中位数为1896ng/ml;与本课题组前期研究建立的儿童MBL正常参考值1615070ng/ml（P2.5P97.5, n=470例）比较,RRTI组MBL水平低于正常儿童组（p<0.05）。70例RRTI儿童有8例（11.4﹪）MBL水平小于161ng/ml。2、MBL结构基因54密码子A/A、A/B、B/B基因型分别对应高、中、极低MBL水平,三组比较差异有统计学意义（p<0.05）。3、MBL启动子区-550位点的H/H、H/L、L/L基因型分别对应高、中、低MBL水平,三组比较差异有统计学意义（p<0.05）。启动子-221位点的Y/Y、Y/X、X/X基因型分别对应高、中、低MBL水平,三组比较差异有统计学意义（p<0.05）。启动子+4位点P/P、P/Q、Q/Q基因型对应的MBL水平三组间比较差异无统计学性意义（p>0.05）。启动子区HY/HY、LY/LY、LX/LX基因型分别对应高、中、低MBL水平。HYP单体型携带者MBL水平较LXP单体型携带者MBL水平高。4、对照组与RRTI组结构基因第一外显子点突变以54密码子为主,两组均未检出52、57密码子突变个体。RRTI组54密码子等位基因B及A/B型突变杂合子频率显著高于对照组（p<0.05）。RRTI组启动子区HYP单体型频率较对照组低,LXP单体型频率较对照组高（p<0.05）。RRTI组LXP/LXP基因型频率显著高于对照组（p<0.05）。MBL缺陷基因型（A/B+XA/XA+B/B）在RRTI组比例显著高于对照组（p<0.05）。5、RRTI儿童IgG水平较健康同龄人水平降低（p<0.05）,而IgA、IgM、C3水平与健康同龄人相比无显著性差异（p>0.05）。20﹪RRTI儿童具有IgG亚类缺陷,以IgG3-4最常见;8例MBL水平低下者有4例合并Ig缺陷,其中3例（37.5﹪）为IgG亚类缺陷。6、RRTI组中伴Ig缺陷与不伴Ig缺陷组MBL水平较正常对照组均明显降低,MBL缺陷基因型频率较对照组明显增高,差异有统计学意义（p<0.05）,而该两组间无明显差异（p>0.05）。结论:1、MBL结构基因54密码子与启动子区-550、-221位点的基因多态性影响MBL水平。A、H、Y等位基因对应高MBL水平,B、L、X等位基因对应低MBL水平。HYP单体型与高MBL水平相关,LXP单体型与低MBL水平相关。2、MBL水平低下与儿童RRTI的易感性相关;与低MBL水平相关的等位基因B及LXP单体型是儿童RRTI的危险因素,而高产量的HYP单体型对儿童RRTI具有一定的保护作用。3、IgG水平低下及IgG亚类缺陷是儿童RRTI的重要原因之一。4、无论是否同时合并体液免疫缺陷,MBL缺陷均是儿童RRTI的易感因素,提示作为天然免疫防御系统中的重要分子,MBL在儿童抗感染免疫中起到重要作用。
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标签：甘露聚糖结合凝集素论文; 血浆水平论文; 基因多态性论文; 反复呼吸道感染论文;