50Hz低频弱磁场诱导EGF受体聚集效应的研究

论文摘要

在配体缺或的情况下,极低频弱磁场（ELF-MF）（0. 4mT,50Hz）作用于中国仓鼠肺成纤维（CHL）细胞,观察到细胞膜表皮生长因子受体（EGFR）发生了同配体诱导类似的、能激活EGFR信号通路的、时间依赖性的磁场诱导的聚集（clustering）现象。利用原子力显微镜（AFM）、透射电子显微镜（TEM）以及激光共聚焦扫描荧光显微镜观察了磁场对离体受体聚集和对CHL细胞上受体聚集的影响。由AFM得到的结果显示,浓度为5ug/ml离体EGFR蛋白在工频磁场作用下发生聚集,在两维尺度上出现二倍体、三倍体甚至更高程度的聚集,场作用后蛋白聚集颗粒的平均半高宽由21. 7±2. 2nm增大到33. 0±4. 0nm,最可几高度由1. 42±0. 18nm增加到3. 08±0. 17nm。利用透射电镜（TEM）也得到类似结果:EGFR颗粒的平均直径由11. 63±1. 11增大到19. 88±2. 53nm。而且这种由磁场引起的聚集效应明显呈时间依赖性,磁场作用90分钟EGFR蛋白的高度和大小变化逐渐趋于饱和甚至减弱。利用Alexa-488-EGF/EGFR结合实验以及共聚焦荧光显微镜考察了磁场辐射对EGF/EGFR结合的影响,结果显示受配体平均结合能力稍有提高,但没有显著性差异;利用还原态谷胱甘肽（GSH）还原离体EGFR约一半二硫键,结果显示没有影响磁场诱导的受体聚集;但是细胞实验和离体EGFR实验同时显示,EGFR的特异性酪氨酸激酶抑制剂PD153035（PD）显著地抑制了磁场诱导的受体聚集。上述结果表明磁场直接作用于EGFR使其聚集,提示磁场作用的关键部位是胞内酪氨酸激酶域,因此膜上受体也是低频弱磁场的可能作用位点之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• §1 材料与试剂
• §2 实验仪器
• §3 磁场辐照系统
• §4 方法
• 4.1 CHL细胞培养
• 4.2 DPH荧光探针检测膜的流动性
• 4.3 原子力显微镜观测EGFR拓扑学结构
• 4.4 透射电子显微镜检测EGFR分布
• 4.5 流式细胞仪测EGFR与EGF结合
• 4.6 共聚焦显微镜观测EGFR分布状态
• 第三章 实验结果与讨论
• §1 50Hz低频磁场对膜流动性的影响
• §2 原子力显微镜观察磁场对离体受体的影响
• 2.1 磁场暴露对EGF受体高度的影响
• 2.2 磁场暴露对EGF受体半高宽的影响
• 2.3 磁场暴露后EGFR聚集程度统计
• §3 透射电子显微镜观察磁场对离体EGFR的影响
• §4 磁场诱导的EGFR聚集的时间依赖性考察
• §5 Glutathione还原二硫键对磁场诱导EGFR聚集的影响
• §6 磁场对膜上EGF受体与EGF结合能力的影响
• 6.1 流式细胞仪检测磁场作用前后细胞上EGF受体与EGF的结合
• 6.2 共聚焦显微镜观察磁场对EGF受体与EGF结合的影响
• §7 PD153035对磁场诱导的EGFR聚集的影响
• 第四章 总结与展望
• 附录Ⅰ
• 附录Ⅱ
• 参考文献
• 后记