TNF-α联合PGE2和氧化苦参碱对成纤维细胞信号物质的影响

论文摘要

目的:研究肿瘤坏死因子-alpha（TNF-α）联合前列腺素E2（PGE2）和氧化苦参碱对肺成纤维细胞信号物质的影响,从细胞信号转导的角度探讨尘肺发病机制,为寻找治疗尘肺的分子靶点提供依据。方法:对SD大乳鼠肺成纤维细胞原代培养,传至4-5代后,用不同浓度的TNF-α、不同浓度的PGE2联合TNF-α、不同浓度氧化苦参碱联合TNF-α刺激成纤维细胞后,检测如下指标:1.放射免疫技术测定细胞内1,4,5-三磷酸肌醇（IP3）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的含量。2.流氏细胞技术测定细胞内钙离子(Ca2+)的浓度。3.免疫细胞化学技术测定细胞膜TNF-α受体的表达。结果:1.TNF-α作用成纤维细胞时,随着TNF-α剂量的增加,TNF-α受体表达阳性率、IP3cpm值和Ca2+浓度均呈上升趋势,对照组与其它三个剂量组比较,有明显差异（P<0.05）,Ca2+流氏图显示,10μg/L组（蓝图）Ca2+浓度流氏图的高峰较其它三个组明显右移;10μg/L TNF-α组cAMP、cAMP/cGMP值在4h明显高于其它组（P<0.05）;在24h较其它组低。2.TNF-α与PGE2联合作用时,TNF-α受体表达阳性率、30s和60s的IP3cpm值、Ca2+浓度在各个联合作用组较TNF-α单独作用时要低,Ca2+浓度流氏图显示,当PGE2浓度为2.0μg /L时（黄图）,Ca2+荧光峰左移明显;随着PGE2剂量的增加,cAMP表现为先升高后降低;10μg/L TNF-α组cAMP值较其它组低,其差异有显著性（P<0.05）;4h时,10μg/L TNF-α+0.5μg/L PGE2组的cAMP/cGMP比值较10μg/L TNF-α组明显升高;4h各个组cAMP/cGMP比值均比24h高。3.TNF-α与苦参碱联合作用时, TNF-α受体表达阳性率、Ca2+浓度在各个联合作用组较TNF-α单独作用时低,Ca2+流氏图显示,当苦参碱浓度为800mg/L（蓝图）时,流氏图高峰明显左移;随苦参碱浓度的升高,cAMP值 和cAMP/ cGMP比值逐渐升高,当苦参碱浓度为800mg/L时,cAMP值和cAMP/ cGMP比值达到最高。结论:1.TNF-α与细胞膜上的相应受体结合后,可能通过改变GPCR介导的信号通路上第二信使物质,从而对肺成纤维细胞发挥作用。2.外源性PGE2可能是治

论文目录

• 前言
• 第一部分
• 结果
• 讨论
• 第二部分
• 结果
• 讨论
• 第三部分
• 结果
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢