人PTP1B催化结构域的克隆表达及其抑制剂的筛选

人PTP1B催化结构域的克隆表达及其抑制剂的筛选

论文摘要

为了筛选人PTP1B 催化结构域的非肽类抑制剂,本研究以人PTP1B基因为模板,克隆了PTP1B 催化结构域基因△PTP1B,在大肠杆菌BL21中进行了高效表达。并利用离子交换、凝胶层析等技术分离纯化了△PTP1B。从60 种中药单体中初步筛选出两类ΔPTP1B 特异性抑制剂,通过测定抑制剂的IC50, Ki 值等动力学方面的研究来确定抑制剂的类型。抑制剂的类型可以揭示抑制剂与ΔPTP1B 结合的特异性。通过体外动力学实验得到在ΔPTP1B 和ΔTC-PTP 分别存在的条件下测定抑制剂的IC50值,通过数值比较初步判断9 号和35 号对ΔPTP1B 的抑制具有特异性。9号为竟争性抑制,Ki 值为18.76nM。同时,我们采用了胰岛素受体敏感的细胞系HT1080, NIH3T3 来研究抑制剂对胰岛素受体细胞信号传导通路的影响。终浓度为10μM 的9 号抑制剂在细胞系HT1080 中,与胰岛素受体相关的调节细胞生长的细胞信号通路中对PTP1B 具有很好的抑制作用。与国外文献报道的抑制剂相比具有很高的应用价值。

论文目录

  • 前言
  • 第一部 ΔPTP18及ΔTC-PTP催化结构域的分离纯化
  • 1.1 实验材料
  • 1.2 实验方法
  • 1.3 结果与讨论
  • 1.4 小结
  • 第二部分ΔPTP18非肽类抑制剂的筛选
  • 2.1 实验材料
  • 2.2 实验方法
  • 2.3 小结
  • 第三部分ΔPTP18非肽类抑制剂的动力学分析
  • 3.1 常温条件下ΔPTP18Km 值
  • 3.2 IC50的测定
  • 3.3 Ki的测定
  • 3.4 小结
  • 第四部分PTP18抑制剂在细胞水平的作用
  • 4.1 实验材料
  • 4.2 实验方法
  • 4.3 结果与讨论
  • 4.4 小结
  • 总结
  • 参考文献
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 致谢
  • 导师简介
  • 作者简介
  • 相关论文文献

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