Hedgehog信号通路对宫颈癌的影响

论文摘要

目的:探讨Hedgehog（Hh）信号通路在宫颈癌组织与细胞系的表达情况,并初步研究Hh信号通路抑制剂cyclopamine对宫颈癌细胞系HeLa和SiHa的杀伤作用和机制,为宫颈癌的早期诊断及治疗新靶点的发现提供理论依据。方法:（1）用免疫组织化学染色法检测Shh,Ihh,Ptch,Smo,Gli-1,Gli-2,Gli-3抗体在38例鳞状细胞癌,23例CINⅢ,10例CINⅡ,4例CINⅠ,32例正常宫颈粘膜上皮组织标本中的表达及分布;（2）提取38例宫颈癌组织中的DNA,采用聚合酶链反应（PCR）检测人乳头瘤病毒（Human Papillomavirus,HPV）16和18;（3）应用MTT法检测cyclopamine对体外培养的宫颈癌细胞系HeLa和SiHa的生长抑制作用,同时观察细胞的形态学变化;（4）通过免疫细胞化学染色法观察HeLa细胞中Hh信号通路相关基因蛋白及Bax和Bel-2的表达情况。结果:（1）在宫颈癌和癌前病变组织（CINⅡ/Ⅲ）中Hh信号通路相关基因蛋白表达均显著高于正常宫颈粘膜组织。除Gli-1/2阳性表达位于细胞质和细胞核外,其余Hh信号通路相关基因蛋白表达均位于细胞质。Ihh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-3在正常宫颈粘膜上皮中几乎不表达。在宫颈癌中,上述七种Hh信号通路相关基因蛋白表达与正常宫颈组织相比显著增强（P＜0.05）。Shh的表达在正常宫颈上皮向CIN转变及CIN向宫颈癌转变过程中呈双重（均）增强。以上结果提示Hh信号通路在宫颈癌及CIN中被广泛激活。（2）38例宫颈癌组织中HPV16阳性率是71.1%,而HPV18均呈阴性。在宫颈癌组织中HPV16和18的感染与Hh信号通路相关基因蛋白表达无显著性关系。（3）MTT比色法测定结果显示cyclopamine能抑制HeLa和SiHa细胞增殖,其抑制率呈剂量依赖性;倒置显微镜下可观察到,两细胞株的cyclopamine组形态和数量上均出现改变。（4）免疫细胞化学染色结果显示,经cyclopamine处理的HeLa细胞中Hh信号通路相关基因蛋白和Bcl-2表达水平较对照组（tomatidine）相比明显降低;而Bax的表达水平增强。结论:Hh信号通路在宫颈癌中异常激活,并参与宫颈癌的发生发展过程;该通路抑制剂cyclopamine通过诱导凋亡而抑制宫颈癌细胞的增殖。因此Hh信号通路有可能被视为宫颈癌治疗的新靶点。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料与试剂
• 2.2 实验方法
• 2.3 数据的统计学处理
• 第三章 结果
• 3.1 Hh信号通路相关基因蛋白在宫颈癌及其癌前病变组织中的表达
• 3.2 宫颈癌及其癌前病变组织中HPV感染情况
• 3.3 MTT法检测cyclopamine对宫颈癌细胞株HeLa和SiHa增殖的影响
• 3.4 Hh信号通路相关基因在HeLa细胞中的表达
• 3.5 Bax、Bcl-2在宫颈癌HeLa细胞中的表达模式
• 第四章 讨论
• 第五章 小结
• 第六章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 附录