松苗猝倒病生防细菌活性物质及抑病效果研究

论文摘要

本文对从湖北不同苗圃松苗根际土壤中分离得到的生防菌株进行了筛选鉴定,并测定了对松苗猝倒病主要病原菌的室内抑菌效果;在此基础上,进一步与已知生防菌株C23和美国农业部根病生物防治实验室（USDA-ARS,RootDisease Biological Control Unit）提供的优良生防细菌菌株进行了室内和田间防病效果比较试验;并对生防菌株C23抗菌活性物质进行了检测和定性分析。主要结果如下:1.从湖北省不同林区松苗根际筛选获得了21株具有生防效果的细菌菌株。通过对松苗猝倒病菌拮抗效果比较测定,进一步筛选得到12株具有较强拮抗作用的生防菌株。根据其培养特性和相关生物学性状,鉴定出其中3株（L-2,L-5,L-8）为芽孢杆菌。同时对生防菌株C23测序鉴定,结果显示该菌株为洋葱伯克霍尔德菌（Burkholderia cepacia）。2.供试9种生防菌对松苗猝倒病主要病原菌室内抑菌效果表明,不同生防菌株对不同病原菌抑制指数有所差异。对丝核菌A,MVP1-4与C23的抑菌效果较好,T=0.7时,抑制指数分别为35.11,33.24;T=1时,抑制指数为22.23,21.67。对于丝核菌B,T=0.7时Q37-87拮抗效果较好,抑制指数为34.59;T=1时,C23拮抗效果较好,抑制指数为21.16。对于镰刀菌,T=0.7时,FFL1R8的拮抗效果最好,抑制指数为39.06;T=1时,Q2-87抑制指数为21.21,拮抗效果最好。对于链格孢菌,T=0.7时拮抗效果最好的为Pf-5,抑制指数为30.50。T=1时,拮抗效果较好的为1M1-96,抑制指数为17.12.3.室内和田间防病效果比较试验显示,室内盆栽湿地松苗36d后调查,采用浸根方法施用5种供试菌1M1-96,HT5-1,Q37-87,FFL1R8,C23表现出较好的防病效果,存活率平均为44.06%,而对照为28.5%。使用灌根处理的供试菌的防病效果没有很大差异,只有C23和1M1-96的防病效果高于对照。田间试验,供试生防菌株对猝倒病均有明显防效。4.研究摸清了C23菌株发酵粗提液最适培养基,其粗提液中抗菌物质基本特性表现为对热稳定,具有一定的耐酸、碱能力,能够被蛋白酶K酶解,采用80%饱和度的硫酸铵盐析,沉淀物具有抑菌活性,表现出蛋白质的某些特性,据此认为该抗菌物质可能是蛋白质或肽类物质。本研究初步证实了相关生防菌对松苗猝倒病主要病原菌的抑菌作用和室内、田间防病效果,并明确了生防菌株C23发酵粗提液抗菌活性物质的相关特性,为防治松苗猝倒病生防产品的开发应用奠定了基础。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 文献综述
• 1 生防细菌的研究进展
• 1.1 生防细菌的特点、种类及抑菌机制
• 1.1.1 生防细菌的特点
• 1.1.2 生防细菌的种类
• 1.2 生防细菌产生拮抗物质的种类
• 1.2.1 细菌素类物质
• 1.2.2 抗生素及次生代谢产物
• 2 洋葱伯克霍尔德菌的研究进展
• 2.1 洋葱伯克霍尔德菌的分类
• 2.2 洋葱伯克霍尔德菌在工农业上的应用
• 2.2.1 对有毒物质及油脂的生物降解作用
• 2.2.2 植物生长的促生菌
• 2.2.3 植物病害的生物防治菌
• 2.3 作为生防菌的作用机制
• 2.3.1 竞争作用
• 2.3.2 产生多种具有抗菌活性的代谢产物
• 2.4 洋葱伯克霍尔德菌研究中的热点及难点
• 2.4.1 人类致病菌与环境菌株的区别
• 2.4.2 鉴定的难点
• 2.4.3 人体致病菌毒力的研究
• 3 课题研究内容、目的、意义
• 第二章 生防细菌的筛选与形态鉴定
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 细菌来源
• 1.1.2 供试菌株
• 1.1.3 试剂与培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 根际细菌的分离
• 1.2.2 生防菌株的室内筛选
• 1.2.3 细菌形态的初步鉴定
• 1.2.3.1 菌落形态鉴定
• 1.2.3.2 革兰氏染色
• 1.2.3.3 鞭毛染色
• 1.2.3.4 孔雀绿藏红染色法观察芽孢
• 2 结果与分析
• 2.1 根际拮抗细菌生物学鉴定
• 3.小结与讨论
• 第三章 生防细菌在松苗根际的定殖与防病试验
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 土样与种子
• 1.1.2 供试菌株
• 1.1.3 培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 平板抑菌测定
• 1.2.2 室内防病试验
• 1.2.3 田间防病试验
• 1.2.4 种子包衣试验
• 2 结果与分析
• 2.1 平板抑菌测定结果
• 2.2 室内防病实验结果
• 2.3 田间防病试验
• 2.4 种子包衣试验
• 3.小结与讨论
• 第四章 菌株C23抗菌物质的检测及特性分析
• 1 材料和方法
• 1.1 材料
• 1.1.1 供试菌株
• 1.1.2 培养基
• 1.2 方法
• 1.2.1 C23产生抗菌物质的最适培养基筛选
• 1.2.2 抗菌物质活性检测
• 1.2.3 抗菌物质的基本特性分析
• 1.2.3.1 不同温度对粗提液抑菌活性的影响
• 1.2.3.2 不同pH值对粗提液抑菌活性的影响
• 1.2.3.3 蛋白酶K对粗提液抑菌活性的影响
• 1.2.3.4 不同极性提取溶剂中抗菌物质活性测定
• 1.2.3.5 最适的硫酸铵溶液饱和度的确定
• 2.结果与分析
• 2.1 C23产生抗菌物质的最适培养基
• 2.2 抗菌物质活性检测
• 2.3 抗菌物质的基本特性分析
• 2.3.1 不同温度对粗提液的抑菌活性影响
• 2.3.2 不同pH值对粗提液抑菌活性的影响
• 2.3.3 蛋白酶K对粗提液抑菌活性的影响
• 2.3.4 不同极性提取溶剂中抗菌物质活性测定
• 2.3.5 最适的硫酸铵溶液饱和度的确定
• 3.小结与讨论
• 第五章 主要结论与进一步研究的建议
• 1.主要结论
• 2.进一步研究的建议
• 参考文献
• 致谢
• 附录