论文摘要
目的:本实验在成功建立颈动脉粥样硬化斑块大鼠模型的基础上,探讨通塞脉片干预治疗对颈动脉硬化斑块、血清脂联素及血脂的影响,以判定药物疗效,并为其在临床治疗提供可靠的实验依据。方法:1.分组与模型制备:90只清洁级雄性SD大鼠,适应性喂养1周后,随机处死10只用于初始指标的检测,余下大鼠再随机分为4组:正常组、模型组、预防治疗组、治疗组（每组各20只）。模型组、预防治疗组、治疗组大鼠喂食高脂饲料,并在实验起始连续四天给予腹腔注射维生素D3针（17.5万IU/kg/天）以诱导大鼠颈动脉粥样硬化斑块形成;正常组仅喂食普通颗粒饲料。预防治疗组在喂食高脂饲料当天开始每天给予通塞脉灌胃给药（6.22g生药/kg）,正常组、模型组和治疗组大鼠给予等量的生理盐水灌胃,连续8周。从第9周起,治疗组给予灌胃给药,其它组处理同前,直到12周末。所有动物自由饮水,分笼饲养。2.高脂饲料配方:3%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、81.3%普通饲料。3.标本采集:在正式实验初始随机抽取10只大鼠处死,然后分别于第8周末及第12周末从每组随机抽取10只大鼠处死,留取并保存同等部位颈部动脉组织和血标本,以备做大体病理观察及各项指标检测。4.血清脂联素浓度检测方法:采用酶联免疫吸附实验法（竞争法）检测,严格按照说明操作,60分钟内读数。以标准品浓度为纵坐标,OD值为横坐标,利用CurveExpert 1.3软件绘制标准品曲线（附图1）。根据血清样品的OD值可在标准曲线上查出其浓度,换算结果见附表。5.血脂检测方法:采用酶标法测定血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白（LDL）浓度。6.统计学处理:实验中所得数据均以均数+标准差（ x±s）表示,以Excel数据库整理后用SPSS13.0统计软件包进行统计分析。两组间的计量资料比较采用成组设计的t检验,两组以上的计量资料比较采用方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.在不同时间点,模型组大鼠脂联素浓度较初始值均有不同程度降低,差异有统计学意义（P<0.05）。TC、TG、LDL浓度较初始值也均有所升高,差异有统计学意义（P<0.05）。2.预防治疗组大鼠各指标的变化情况:第8周末模型组、预防治疗组脂联素浓度均明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;预防治疗组脂联素浓度高于模型组,差异有统计学意义（P<0.05）。第12周末模型组脂联素浓度明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）,而预防治疗组脂联素浓度虽然也低于正常对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）;预防治疗组脂联素浓度高于模型对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。第8周末模型组、预防治疗组TC、TG、LDL浓度均高于正常组,预防治疗组TC、TG、LDL浓度低于模型组,差异均有统计学意义（P<0.05）。第12周末模型组、预防治疗组TC、TG、LDL浓度均明显高于正常组,预防治疗组TC、TG、LDL浓度低于模型对照组,差异均有统计学意义（P<0.05）。3.治疗组大鼠各指标的变化情况:第8周末模型组、治疗组脂联素浓度均明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组和模型组的脂联素浓度,差异无统计学意义（P>0.05）。第12周末模型组、治疗组脂联素浓度均明显低于正常对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组脂联素浓度高于模型对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。第8周末模型组、治疗组TC、TG、LDL浓度均高于正常组,差异均有统计学意义（P<0.05）;治疗组和模型组的TC、TG、LDL浓度差异无统计学意义（P>0.05）。第12周末模型组、治疗组TC、TG、LDL浓度均明显高于正常组,治疗组TC、TG、LDL浓度低于模型组,差异均有统计学意义（P<0.05）。4.各组大鼠颈动脉光镜下形态学观察（HE染色）:第8周末模型组与治疗组颈动脉内皮下聚集大量的泡沫细胞和纤维母细胞及胶原,脂质坏死核心明显,白色、淡黄色脂质斑块及大量脂肪颗粒。预防治疗组内膜较为完整、增厚不明显、脂肪浸润少,正常组变化不大。第12周末可见模型组明显颈动脉粥样硬化斑块以及不稳定斑块,偏心斑块数量增加,有的脂质核心已经脱离、消失。通塞脉预防治疗组内膜较完整、增厚不明显、脂肪浸润很少,治疗组颈动脉内膜增厚程度明显减轻,内皮下泡沫细胞及周围炎性细胞数量减少,脂质坏死核心面积减小,仍有少量纤维母细胞及胶原,说明斑块较前消退或程度减轻、稳定性增加。结论:1.本实验采用改进的造模方法,利用高脂饮食联合维生素D3腹腔注射成功的制备了较理想的大鼠颈动脉粥样斑块模型。2.在预防治疗组和治疗组中,通塞脉可提高脂联素浓度、降低TC、TG、LDL浓度,延缓颈动脉粥样斑块进展、使已有粥样斑块程度减轻的作用。3.通塞脉预防治疗组和治疗组均有明显的治疗效果,是防治动脉粥样硬化的又一较理想的中成药物,值得在临床进一步推广和应用。
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