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莱姆病分子生物学和诊断新技术的研究

2020-11-28阅读(236)

莱姆病分子生物学和诊断新技术的研究

论文摘要

莱姆病是一种新发现的人兽共患性传染病,临床可表现为多器官的损害,严重者终身致残甚至死亡。莱姆病临床症状表现多样,易与其它疾病相混淆,因而实验室诊断结果极为重要。目前实验室诊断方法各有其优点和局限性。故探求一种简便、快捷、可现地检测的诊断方法尤为重要。莱姆病外膜蛋白A(OSPA)产生抗体持续时间长,与其他微生物的交叉反应性低,并具有良好的免疫原性,本文应用PCR方法开展吉林地区流行病学研究,研究结果表明吉林地区为莱姆病自然疫源地。首次将表面等离子体子共振(SPR)技术应用于莱姆病诊断,原创性建立莱姆病SPR诊断新技术并开发实验装置一套,不同免疫复合反应体系SPR传感器光谱共振峰位不同,因此交叉反应几乎无影响;另外可以通过优化光谱分辨率提高检测灵敏度。实验结果证明,该方法特异度高(实验中无假阳性)、灵敏度高、检测时间短,有利于现地检测。首次采用半导体量子点荧光免疫分析技术建立莱姆病诊断新技术。半导体量子点(QDs)具有发射强度和光化学稳定性强、光漂白域值高、可通过物理尺度调控发射峰位、光谱覆盖范围宽、荧光发射峰窄而且对称的高斯分布等特点。该方法灵敏度高,检测时间短,另外检测体系荧光共振能量转移获得的检测波长明显区分于背景,方法具有高特异度。基于波长型SPR传感器可以实时获得抗原/抗体复合反应信息,并能够精确计算出结合常数的优势,首次发展莱姆病基因型现场筛查技术,实验结果证明,该技术可为莱姆病发病机理、治疗和疫苗开发研究提供有力的工具。

论文目录

  • 提要
  • 英文缩略词表
  • 第一篇 绪论
  • 第一章 莱姆病诊断研究进展
  • 第一节 莱姆病螺旋体简介
  • 第二节 莱姆病的临床表现
  • 第三节 莱姆病的实验室诊断
  • 一、病原体直接检测
  • 1、莱姆病螺旋体分离株的培养
  • 2、莱姆病螺旋体分离株的分子水平的检测
  • 二、莱姆病螺旋体感染的免疫学诊断
  • 1、免疫诊断中莱姆病螺旋体抗原的重要性
  • 2、抗体检测方法
  • 3、新型酶免疫测定方法
  • 4、其他的抗体检测方法
  • 三、莱姆病的细胞免疫反应：T 淋巴细胞和单核细胞增殖检测
  • 四、小结
  • 第二章 立题依据
  • 第二篇 实验研究
  • 第一章 莱姆病分子生物学研究
  • 第一节 实验材料
  • 一、仪器
  • 二、试剂及溶液配制
  • 第二节 实验方法
  • 一、蜱的捕获
  • 二、莱姆病螺旋体的分离培养与蜱带菌率的鉴定
  • 三、莱姆病螺旋体分离株的分子水平检测
  • 第三节 实验结果
  • 第四节 讨论
  • 第二章 莱姆病SPR 诊断新技术的研究
  • 第一节 实验材料
  • 一、仪器
  • 二、试剂及液体配制
  • 三、标本
  • 第二节 实验方法
  • 一、免疫实验动物（兔）获得抗伯氏疏螺旋体阳性血清
  • 二、SPR 试验程序
  • 三、SPR 诊断技术建立
  • 1、兔抗血清效价试验
  • 2、技术方法评价试验
  • 3、确定诊断界点
  • 4、SPSS16.0 软件ROC 分析
  • 5、梅毒干扰试验
  • 6、双盲检测
  • 第三节 实验结果
  • 第四节 讨论
  • 第三章 莱姆病QDs 诊断新技术的研究
  • 第一节 试验材料
  • 一、仪器与实验装置
  • 二、试剂及液体配制
  • 三、标本
  • 第二节 实验方法
  • 一、半导体荧光量子点QDs 的制备及表征
  • 二、半导体荧光量子点QDs 标记伯氏疏螺旋体
  • 2 纳米复合物及其表征'>三、反相微乳液技术制备CdTe@ SiO2纳米复合物及其表征
  • 四、伯氏疏螺旋体QDs 直接免疫荧光分析诊断技术研究
  • 2 夹心免疫荧光分析诊断新技术研究'>五、伯氏疏螺旋体CdTe@ SiO2夹心免疫荧光分析诊断新技术研究
  • 第三节 实验结果
  • 第四节 讨论
  • 第四章 莱姆病螺旋体基因型SPR 鉴定技术的研究
  • 第一节 试验材料
  • 一、仪器
  • 二、试剂及液体配制
  • 三、标本
  • 第二节 实验方法
  • 一、SPR 试验
  • 二、所用公式的推导和常数的计算
  • 第三节 实验结果
  • 第四节 讨论
  • 结论
  • 参考文献
  • 本研究创新点及意义
  • 攻读期间发表的论文及科研课题
  • 中文摘要
  • Abstract
  • 致谢

    • 相关论文文献

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