NF-kB“圈套”对大鼠海马神经元内COX-2调控及海马结构保护作用的研究

论文摘要

背景:癫痫（Epilepsy）为重大神经疾患之一,反复自发发作是其主要特点。它给患者带来的巨大伤害是由癫痫反复发作（seizure）所引起的脑损伤。已有研究表明,由癫痫发作所引起的脑内炎症反应是导致癫痫发作后脑组织病理改变,特别是海马结构损伤（包括海马内神经元脱失、神经元调亡、胶质细胞增生、纤维发芽、海马硬化等）的主要原因之一,因此探讨和研究由癫痫发作所致脑内及海马等癫痫敏感脑区的炎症反应机制,采取措施防治由癫痫反复发作所带来的脑损伤,在癫痫尚难以根治的今天,对改善癫痫患者的生活和学习会起到积极的作用。核转录因子（NF-kB）的激活可高效诱导广泛基因表达,调节细胞因子靶基因的转录,在炎症和免疫反应中起着调控作用。虽然少数几篇文献报道了癫痫发作时伴随着脑内NF-kB表达,并诱导了神经元的死亡和胶质细胞激活,促进了癫痫大鼠脑内的病理学改变,但在癫痫活动中是否由于NF-kB的激活而调控了其下游基因之一COX-2的高表达,才导致了脑内的炎症反应和一系列病理变化,至今未见报道。目的:探讨癫痫活动中是否由于NF-kB的激活而调控了其下游基因COX-2高表达,才导致了脑内的炎症反应和一系列病理变化。通过对体外培养的细胞的观察为体内实验提供理论支持,并进一步为控制癫痫脑损伤及其它神经退行性疾病的炎症反应提供一定的理论依据。方法:取幼鼠海马神经元进行培养,将合成的与NF-kB顺式元件相一致的双链寡聚脱氧核苷酸（ kBdecoy DNA oligodeoxynucleotides,kB-decoy）和相应的无关序列（错配-decoy）作为对照,经非病毒的高效率、无毒性转染载体ExGen500包裹后,将kB-decoy和错配-decoy分别转入神经元内,再用NF-kB激活剂脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导NF-kB活化,用电泳迁移率实验（EMSA）方法观察NF-Kb的活化,并以RT-PCR和免疫细胞化学法检测COX-2的表达。结果:通过反复的培养海马神经元,分组,实验得到以下结果:培养出的细胞证实为海马神经元;作为NF-kB激活剂LPS使用100ng/ml刺激海马神经元6h,NF-κB发生显著性的转核活化,12h达到高峰,然后开始下降,36h已处于低水平的维持状态。且12h时NF-κB的活化随LPS的刺激剂量增加而增加;COX-2活性测定显示:LPS刺激12h后COX-2表达错配-decoy组和LPS组显著高于NF-κB-decoy组,而LPS组和错配-decoy组差异无统计学意义。结论:培养出的细胞为海马神经干细胞,可以用于体外实验;LPS作为NF-kB的激活剂最佳作用时间为12小时,最佳剂量为100ng/ml;设计合成的NF-kB-decoy作为NF-kB的抑制剂有效;NF-kB的激活调控了其下游基因之一COX-2的高表达。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 实验材料
• （五） 实验方法
• （六） 实验结果
• （七） 讨论
• （八） 结论
• （九） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢