秦皮乙素诱导SGC-7901肿瘤细胞凋亡的实验研究

论文摘要

秦皮乙素是中药秦皮香豆素类有效成分之一,具有抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗微生物等广泛的药理作用,而其抗肿瘤作用的机制尚未有研究。本文采用体外实验研究方法对秦皮乙素的抗肿瘤作用及机制进行研究,利用细胞生物学、免疫组化等方法,探讨秦皮乙素是否通过死亡受体途径来诱导肿瘤细胞的凋亡。实验用MTT法、SRB法考察秦皮乙素对人胃癌细胞SGC-7901的生长抑制作用,结果显示秦皮乙素具有抑制SGC-7901细胞生长的作用,并呈剂量依赖性。给药作用48h后,MTT法测得秦皮乙素对SGC-7901细胞的ICso为0.54mmol·L-1：SRB法测得秦皮乙素对SGC-7901细胞的GIso为0.286mmol·L-1。透射电子显微镜观察SGC-7901细胞超微结构的结果显示,秦皮乙素不同剂量（0.28mmol·L-1、0.56mmol·L-1、1.12m mol·L-1‘）作用48h后,出现细胞微绒毛消失,细胞核内染色质固缩、集边,形成凋亡小体等一系列特征性的凋亡形态学改变。FCM检测SGC-7901细胞凋亡率的结果显示,秦皮乙素不同剂量作用48h后对SGC-7901细胞的凋亡率分别为14.20%、31.28%、54.13%,细胞凋亡率呈明显的剂量依赖性。在以上实验基础上,我们考察了秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡的途径。在秦皮乙素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡机制研究中,采用免疫组化法检测秦皮乙素对死亡受体途径相关蛋白Fas、FasL、FADD的表达以及酶标仪来检测Caspase-8, Caspase-3的活性。结果显示秦皮乙素三个剂量（0.28mmol·L-1、0.56mmol·L-1和1.12mmol·L-1）作用SGC-7901细胞24h后,Fas蛋白表达率分别为37.28%,59.70%,85.23%,与空白对照组比较差异非常显著（P<0.01）；FasL蛋白表达率分别为40.11%,60.38%,87.23%,与空白对照组比较差异非常显著（P<0.01）；FADD的蛋白表达率分别为36.98%,52.34%,86.64%,与空白对照组比较差异非常显著（P<0.01）。以上结果显示,秦皮乙素对Fas、FasL、FADD蛋白表达具有上调作用,且具有一定的剂量依赖性。酶标仪检测Caspase-8活性,其OD值分别为0.118,0.288,0.345（P<0.01）：Caspase-3活性的OD值分别为0.141,0.234,0.338（P<0.01）；表明秦皮乙素作用后细胞内Caspase-8和Caspase-3活性均增强。且三个剂量间成剂量依赖性。综上所述,秦皮乙素在体外可以通过诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡来达到抗肿瘤作用,其诱导肿瘤细胞凋亡的机制可能是通过促进死亡受体途径相关蛋白Fas, FasLFADD的表达,并形成聚合体促进Caspase-8, Caspase-3的表达,从而诱导SGC-7901细胞凋亡。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 课题背景（或引言）
• 1.2 肿瘤概述
• 1.2.1 肿瘤生长的基本特征
• 1.2.2 肿瘤细胞生物学特征
• 1.3 肿瘤细胞的凋亡
• 1.3.1 肿瘤细胞的凋亡及形态学变化
• 1.3.2 细胞凋亡与肿瘤
• 1.3.3 死亡受体介导的信号传导途径
• 1.4 秦皮乙素的研究进展
• 1.4.1 秦皮乙素的化学研究
• 1.4.2 秦皮乙素的药理作用
• 1.5 课题来源及研究建议
• 1.6 论文的研究内容
• 2 秦皮乙素对SGC-7901细胞增殖作用的影响
• 2.1 引言
• 2.2 实验部分
• 2.2.1 试剂与样品
• 2.2.2 仪器与设备
• 2.2.3 药品及试剂配制
• 2.2.4 肿瘤细胞系
• 2.2.5 实验方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 MTT测定结果
• 2.3.2 SRB测定结果
• 2.4 本章小结
• 3 秦皮乙素诱SGC-7901细胞凋亡作用的研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验部分
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 实验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 透射电镜观察SGC-7901细胞凋亡形态的结果
• 3.3.2 流式细胞仪测定细胞凋亡率的结果
• 3.4 本章小结
• 4 秦皮乙素诱导SGC-7901细胞凋亡的死亡受体途径研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验部分
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验方法
• 4.2.3 统计学处理
• 4.3 结果与分析
• 4.3.1 秦皮乙素对SGC-7901细胞凋亡相关基因Fas、FasL、FADD表达的影响
• 4.3.2 秦皮乙素对凋亡相关酶Caspase-8和Caspase-3活性的影响
• 4.4 本章小结
• 5 讨论
• 5.1 体外抗肿瘤作用评价
• 5.2 肿瘤细胞凋亡的形态学检测
• 5.3 流式细胞仪检测SGC-7901细胞凋亡和周期
• 5.4 秦皮乙素对凋亡蛋白表达的影响
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢