蟾酥脂质微球注射液抗肿瘤、镇痛作用药效学研究

论文摘要

中药蟾酥为两栖纲无尾目蟾蜍科动物中华大蟾蜍Bufo bufo gargarizens cantor、黑眶蟾蜍B.melanostictus Schneider.及花背蟾蜍B.raddei strauch.等的耳后腺及皮肤腺所分泌的白色浆液经加工而成,是我国传统的中药材。蟾酥含有多种化学成分,主要分为脂溶性成分和水溶性成分两大类,具有强心、升压、镇痛以及抗肿瘤等多种药理活性,临床应用广泛。研究表明,蟾酥抗癌镇痛活性成分主要为其脂溶性成分,其中以蟾毒灵（bufalin）、华蟾毒配基（cinobufagin）、脂蟾毒配基（resibufogenin）的含量最多、活性最强。本研究中所用的蟾酥脂质微球注射液（BU-LM）是一种含有蟾毒灵（bufalin）、华蟾毒配基（cinobufagin）、脂蟾毒配基（resibufogenin）三种有效成分的新型中药制剂。BU-LM与现有临床应用的蟾酥制剂相比,其有效成分含量高,可控,且具有肝脾靶向性及缓释低毒性等优点。本论文对BU-LM的急性毒性、抗肿瘤、镇痛药效学进行了系统的考察。急性毒性研究结果显示,BU-LM静脉注射给予小鼠LD50值为13.37 mg/kg;腹腔注射给予小鼠BU-LM,LD50为82.01 mg/kg。病理学检测结果表明BU-LM对心脏有明显的毒性,对肝脏、肺脏、肾脏也有不同程度的损伤。应用小鼠移植性肿瘤模型:小鼠S180肉瘤、H22肝癌、Lewis肺癌,对BU-LM的抗肿瘤作用进行了考察。结果表明,腹腔注射给予BU-LM 0.20 mg/kg、0.40 mg/kg、0.80mg/kg对上述三种移植性肿瘤生长具有良好的抑制作用,且具有一定的剂量依赖性,其抑瘤率最高可达到51.9%（小鼠S180肉瘤）、56.4%（小鼠H22肝癌）及53.2%（小鼠Lewis肺癌）,在该剂量下,BU-LM对荷瘤小鼠的免疫器官没有影响。提示,BU-LM具有良好的抗肿瘤作用,且不产生环磷酰胺样免疫抑制。采用小鼠S180肉瘤、小鼠H22肝癌模型,考察了BU-LM与化疗药物环磷酰胺（CTX）联合应用的抑瘤作用,实验结果显示,BU-LM0.80 mg/kg与CTX联用与单独用药比较具有显著性差异（p＜0.05）,提示BU-LM合并化疗具有一定的增效作用。应用单细胞凝胶电泳技术（彗星试验）考察了BU-LM与CTX联用对荷S180肉瘤小鼠外周血细胞DNA的影响。结果表明,CTX可以引起小鼠外周血DNA损伤,BU-LM 0.40 mg/kg与CTX 12.5、25、50 mg/kg联合应用后,联合用药组DNA损伤程度明显降低,与单独应用CTX具有显著性差异（p＜0.001）。提示,BU-LM合并化疗同时具有一定的降低CTX所致外周血细胞DNA损伤的作用。应用经典的醋酸所致小鼠扭体模型、热板致痛模型及小鼠坐骨神经慢性压迫模型考察了BU-LM镇痛作用。实验结果表明,腹腔注射给予BU-LM 0.20 mg/kg-3.20 mg/kg剂量依赖性抑制醋酸所致小鼠扭体数,ED50为0.50 mg/kg。热板实验进一步证实,BU-LM 0.20、0.40、0.80 mg/kg给药后30 min即可以提高小鼠的痛阈值,60 min时BU-LM 0.20、0.40、0.80mg/kg表现出明显的镇痛效果,镇痛效果持续到给药后120min时达峰值.提示蟾酥脂质微球注射液对热板所致疼痛具有良好的镇痛作用,且镇痛作用持续时间较长。在小鼠神经病理性疼痛动物模型—小鼠坐骨神经慢性压迫模型（the chronic constriction injury ofthe sciatic nerve,CCI）试验中,CCI模型小鼠术后4天累积抬右后足的时间则出现显著延长（p＜0.05）,且持续整个实验过程（14天）;热板实验检测结果显示,CCI模型小鼠术后4天痛阈值显著下降（p＜0.05）,同样持续整个实验过程。提示小鼠坐骨神经慢性压迫模型建立成功。BU-LM 0.20、0.40、0.80mg/kg连续给药7天,可以显著抑制CCI小鼠产生的自发性疼痛和诱发性疼痛,呈现一定的剂量依赖性。提示,BU-LM具有良好的抑制神经病理性疼痛作用,推测其具有治疗癌性疼痛的作用。综上所述,本研究表明BU-LM具有良好的抗肿瘤、镇痛作用,为其在临床上抗癌、镇痛以及同时治疗癌症并发的癌性疼痛作用提供了有力的实验依据。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 一、肿瘤及中药
• 二、癌性疼痛
• 三、蟾酥抗肿瘤、镇痛作用研究及其剂型发展
• 四、立题依据
• 实验材料
• 1. 实验动物
• 2. 细胞株
• 3. 药品和试剂
• 4. 实验仪器
• 实验方法
• 第一部分 蟾酥脂质微球注射液急性毒性实验研究
• 1.静脉注射给药小鼠急性毒性实验
• 2.腹腔注射给药小鼠急性毒性实验
• 第二部分 蟾酥脂质微球注射液抗肿瘤作用实验研究
• 第1章 体内抗肿瘤作用实验研究
• 1.1 小鼠移植性肿瘤模型的建立
• 1.2 分组及给药
• 1.3 观察指标
• 1.4 统计学处理
• 第2章 与化疗药物环磷酰胺联合应用的增效减毒作用
• 2.1 与化疗药物环磷酰胺联用对小鼠S180肉瘤、H22肝癌的影响
• 2.2 与化疗药物环磷酰胺联用对荷S180肉瘤、H22肝癌小鼠免疫器官的影响
• 2.3 对正常小鼠外周血细胞DNA的影响
• 2.4 对环磷酰胺所致小鼠外周血细胞DNA损伤的影响
• 2.5 统计学处理
• 第三部分 蟾酥脂质微球注射液镇痛作用实验研究
• 第1章 蟾酥脂质微球注射液对醋酸、热板所致疼痛的镇痛作用
• 1.1 小鼠醋酸扭体法
• 1.2 小鼠热板法
• 1.3 统计学处理
• 第2章 蟾酥脂质微球注射液对坐骨神经损伤小鼠的镇痛作用
• 2.1 小鼠坐骨神经慢性压迫模型建立
• 2.2 蟾酥脂质微球注射液对坐骨神经慢性压迫（CCl）小鼠的镇痛作用
• 2.3 统计学处理
• 实验结果
• 第一部分 蟾酥脂质微球注射液急性毒性实验研究
• 1.静脉注射给药小鼠急性毒性实验
• 2.腹腔注射给药小鼠急性毒性实验
• 第二部分 蟾酥脂质微球注射液抗肿瘤作用实验研究
• 第1章 体内抗肿瘤作用实验研究
• 1.1 蟾酥脂质微球注射液抗肿瘤有效剂量、作用时间确定
• 1.1.1 剂量确定
• 1.1.2 作用时间确定
• 1.2 对小鼠移植性肿瘤的抑制作用
• 1.2.1 对小鼠移植性肉瘤S180生长的抑制作用
• 1.2.2 对小鼠移植性肝癌H22生长的抑制作用
• 1.2.3 对小鼠移植性肺癌Lewis生长的抑制作用
• 1.3 对荷S180肉瘤、H22肝癌小鼠免疫器官的影响
• 第2章 与化疗药物环磷酰胺联用的增效减毒作用
• 2.1 与化疗药物环磷酰胺联用对小鼠S180肉瘤的抑制作用
• 2.2 与化疗药物环磷酰胺联用对小鼠H22肝癌的抑制作用
• 2.3 与化疗药物环磷酰胺联用对荷S180肉瘤、H22肝癌小鼠免疫器官的影响
• 2.4 对正常小鼠外周血细胞DNA的影响
• 2.5 对化疗药物环磷酰胺所致的荷瘤（S180肉瘤）小鼠外周血细胞DNA损伤的保护作用
• 第三部分 蟾酥脂质微球注射液镇痛作用实验研究
• 第1章 蟾酥脂质微球注射液对醋酸、热板所致疼痛的镇痛作用
• 1.1 对醋酸所致小鼠扭体的镇痛作用
• 1.1.1 对醋酸所致小鼠扭体镇痛作用量效关系
• 1.1.2 对醋酸所致小鼠扭体镇痛作用时效关系
• 1.1.3 对醋酸所致小鼠扭体的镇痛作用
• 1.2 对热板所致疼痛的镇痛作用
• 第2章 蟾酥脂质微球注射液对坐骨神经损伤小鼠的镇痛作用
• 2.1 小鼠坐骨神经慢性压迫模型建立
• 2.1.1 一般行为观察及自发性疼痛检测
• 2.1.2 热板实验
• 2.2 蟾酥脂质微球注射液对坐骨神经慢性压迫（CCl）小鼠的镇痛作用
• 2.2.1 对CCl小鼠自发性疼痛的镇痛作用
• 2.2.2 对热刺激所致CCl小鼠诱发性疼痛的镇痛作用
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附图