马尾松花粉多糖的分离纯化、结构表征及其活性研究

论文摘要

本文以马尾松花粉为原料,对其中的花粉活性多糖的提取工艺进行研究,采用DEAE-Sephadex A-25柱层析、Sephadex G-75凝胶柱层析对花粉粗多糖进行了分离和纯化;运用红外光谱分析、紫外扫描分析、气相色谱、气相-质谱联用分析等方法对花粉多糖的结构进行了初步研究;通过体外模拟实验和MTT法研究松花粉多糖对活性氧自由基的清除效果及对三种肿瘤细胞株Sp2/0、HepG2、Hela生长的影响。主要研究结果如下:1.马尾松花粉多糖提取工艺的研究研究了马尾松花粉破壁方法、温度、料液比、提取时间、浸提次数等因素对松花粉多糖提取效果的影响,通过正交实验确定了最佳提取工艺参数。结果表明:超微粉碎破壁方法最好;提取时间为2 h,提取温度为85℃,料水比为1:15,浸提次数为4次,为最佳提取工艺参数,花粉多糖得率为1.70%。2.马尾松花粉多糖的分离及纯化研究采用DEAE-SephadexA-25层析法对花粉粗多糖进行了初步分离,采用Sephadex G-75凝胶柱层析对花粉多糖进一步分级。结果表明:花粉粗多糖以95%乙醇沉淀后上DEAE-Sephadex A-25层析柱,得到四个级分,分别为MTP1、MTP2、MTP3、MTP4,透析后,浓缩冻干处理得淡黄色粉末,得率分别为27.18%、7.03%、9.22%、19.60%;取MTP1,MTP4经Sephadex G-75凝胶柱分级,分别得精制花粉多糖MTP1-A、MTP4-A,得率分别为33.0%和26.0%。3.MTP1-A、MTP4-A的结构初步分析采用红外光谱分析、紫外扫描分析、气相色谱、气相-质谱联用分析等方法对花粉多糖的结构进行了初步研究。结果表明:MTP1-A由甘露糖、葡萄糖、阿拉伯糖组成,各单糖组成摩尔比为1:0.43:0.33;MTP4-A由葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖、甘露糖组成,各单糖摩尔比为1:0.30:0.14:0.11。气-质分析表明MTP1-A、MTP4-A均存在呋喃和吡喃环,紫外扫描分析显示不含糖蛋白,I2-KI反应表明含有较长的侧链和较多的分支,β-消去反应表明存在O-糖苷键。4.马尾松花粉多糖体外抗氧化及抗肿瘤活性研究通过体外模拟实验,研究不同种类的松花粉多糖对活性氧自由基的清除效果,采用MTT法检测了花粉多糖对三种肿瘤细胞株Sp2/0,HepG2,Hela生长的影响。结果表明,不同种类的花粉多糖对超氧阴离子和羟基自由基有一定的量效关系,但是这种量效效应表现的不明显;对DPPH自由基的清除实验表现出较好的活性,且MTP、MTP1-A、MTP4-A的清除率呈现出较好的剂量效应;MTP1、MTP2、MTP3、MTP4对三种肿瘤细胞株Sp2/0、HepG2、Hela的生长均有抑制作用,在实验浓度范围内呈一定的剂量和时间效应。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩写对照表
• 第一章 文献综述
• 1 松花粉研究概述
• 1.1 松花粉的化学组分
• 1.1.1 营养物质
• 1.1.2 生物活性成分
• 2 松花粉的药理功能
• 2.1 延缓衰老
• 2.2 抗氧化
• 2.3 增强免疫
• 2.4 抗肿瘤
• 2.5 抗疲劳
• 2.6 降血糖
• 2.7 其他辅助治疗作用
• 2.8 松花粉的副作用
• 3 花粉多糖的研究进展
• 3.1 花粉多糖的功能
• 3.1.1 多糖的抗凝血及血栓作用
• 3.1.2 花粉多糖抑菌
• 3.1.3 降血脂
• 3.1.4 抗肿瘤
• 3.2 松花粉多糖研究现状
• 4 课题开展的目的和意义
• 第二章 马尾松花粉多糖的提取工艺研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 仪器及试剂
• 2.2.1 化学试剂
• 2.2.2 主要仪器与设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 马尾松花粉基本指标测定
• 2.3.2 马尾松花粉多糖测定方法
• 2.3.3 马尾松花粉破壁方法
• 2.3.4 马尾松花粉多糖的提取
• 3 结果与分析
• 3.1 马尾松花粉基本指标测定结果
• 3.2 松花粉破壁方法的选择
• 3.3 马尾松花粉多糖的提取优化
• 3.3.1 料液比对花粉多糖提取得率的影响
• 3.3.2 温度对花粉多糖提取得率的影响
• 3.3.3 提取时间对花粉多糖提取得率的影响
• 3.3.4 浸提次数对花粉多糖提取得率的影响
• 3.3.5 松花粉多糖提取最优条件选择
• 3.3.6 正交试验的方差分析结果
• 4 讨论
• 第三章 马尾松花粉多糖的分离纯化及其理化性质
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 化学试剂
• 2.3 主要仪器与设备
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 马尾松花粉多糖纯化的工艺流程
• 2.4.2 松花粉多糖的初步纯化
• 2.4.3 松花粉多糖的DEAE-Sephadex A-25离子交换柱层析
• 2.4.4 松花粉多糖的Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱层析
• 2.4.5 马尾松花粉多糖的纯度鉴定
• 2.4.6 马尾松花粉多糖组成成分分析
• 3 结果与分析
• 3.1 松花粉多糖的DEAE-Sephadex A-25离子交换柱层析
• 3.2 松花粉多糖的Sephadex G-75葡聚糖凝胶柱层析
• 3.3 松花粉多糖的纯度鉴定
• 3.4 中性糖含量测定
• 3.5 蛋白质含量测定
• 3.6 半乳糖醛酸含量测定
• 3.7 松花粉多糖基本理化性质
• 4 讨论
• 第四章 马尾松花粉多糖结构和组成研究初探
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 化学试剂
• 2.3 主要仪器与设备
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 马尾松花粉多糖的紫外吸收光谱
• 2.4.2 马尾松花粉多糖的红外光谱测定
• 2.4.3 马尾松花粉多糖的单糖组成分析
• 2.4.4 糖肽键联接方式分析
• 2.4.5 刚果红实验
• 2.4.6 碘-碘化钾反应
• 3 结果与分析
• 3.1 紫外吸收光谱分析
• 3.1.1 马尾松花粉多糖水溶液的紫外吸收光谱
• 3.1.2 松花粉多糖的苯酚—硫酸反应紫外吸收光谱
• 3.2 红外光谱测定
• 3.3 马尾松花粉多糖的单糖组成分析
• 3.3.1 气相色谱分析
• 3.3.2 气相-质谱联用分析
• 3.4 糖肽键联接方式分析
• 3.5 刚果红实验
• 3.6 碘-碘化钾反应
• 4 讨论
• 第五章 马尾松花粉多糖体外抗氧化及抗肿瘤活性研究
• 1 前言
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.2 化学试剂
• 2.3 主要仪器与设备
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 体外抗氧化特性
• 2.4.2 马尾松花粉多糖对肿瘤细胞的体外抑制
• 3 结果与分析
• 3.1 松花粉多糖抗氧化特性
• 3.1.1 松花粉多糖还原能力的测定
• 3.1.2 松花粉多糖对超氧阴离子自由基的清除作用
• 3.1.3 松花粉多糖对羟基自由基的清除作用
• 3.1.4 松花粉多糖对DPPH自由基的清除作用
• 3.2 马尾松花粉多糖对肿瘤细胞的体外抑制
• 3.2.1 马尾松花粉多糖对Sp2/0细胞生长的影响
• 3.2.2 马尾松花粉多糖对HepG2细胞生长的影响
• 3.2.3 马尾松花粉多糖对Hela细胞生长的影响
• 4 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录